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一.研究目的：评价新型抗肿瘤化合物MONCPT对TOPOI的抑制活性、对肿瘤细胞增殖的抑制作用,以及对PC-3和A549裸小鼠移植瘤模型的试验治疗作用,并探索MONCPT诱导肿瘤细胞周期阻滞及抑制肿瘤新生血管生成作用的分子机制。二.研究方法：1. MONCPT的体外抗肿瘤活性研究包括：(1)TOPOI活性抑制试验检测MOCPT对TOPOI活性的影响；(2)MTT法测定MONCPT对9种肿瘤细胞株体外抑制作用,计算其半数抑制浓度(IC50)；(3)建立PC-3和A549裸小鼠移植瘤模型评价MONCPT的体内抗肿瘤活性。2. MONCPT通过周期阻滞抑制肿瘤生长的机制研究包括：(1)流式细胞术检测MONCPT作用PC3细胞和A549的细胞后周期的变化；(2) Western-blotting法检测细胞内周期相关蛋白的表达；(3)siRNA法沉默P53或P38基因的表达,MONCPT作用不同时间后流式细胞术检测细胞周期的变化；(4) siRNA法沉默P53或P38基因的表达,MONCPT作用不同时间后检测细胞周期相关蛋白的表达。3. MONCPT抑制新生血管生成作用的研究：(1)MTT法测定MONCPT对内皮细胞EA.hy926细胞的抑制作用,计算IC50值；(2) AO/EB染色法检测MONCPT作用后EA.hy926内皮细胞的凋亡情况；(3)流式细胞术检测MONCPT作用后EA.hy926内皮细胞的凋亡情况；(4)鸡胚绒毛尿囊膜法检测MONCPT对新生血管生成的影响；(5)HUVEC迁移实验检测MONCPT对新生血管生成的影响；(6)HUVEC血管腔形成实验检测MONCPT对新生血管生成的影响。三.研究结果：1. MONCPT具有广谱有效的体内外抗肿瘤活性：(1) MONCPT可以显著抑制TOPOI的活性,抑制DNA超螺旋的解旋；(2)MONCPT对9种肿瘤细胞表现出较强的体外抑制增殖作用,作用72h后计算半数抑制浓度IC50值为1.0×10-10 M-2.3×10-7M;(3)在A549裸小鼠移植瘤模型中,给药15天后,MONCPT 20 mg/kg、MONCPT 10 mg/kg和MONCPT 5 mg/kg组肿瘤抑瘤率(%)分别为98.0、78.5和32.0,T／C(%)值分别为5.5、30.9和70。结果证实MONCPT在20 mg/kg和10 mg/kg剂量下都可以显著抑制A549肿瘤的生长,具有很好的抗肿瘤活性。在PC-3裸小鼠移植瘤模型中给予MONCPT 17天后,MONCPT 20 mg/kg、MONCPT 10 mg/kg和MONCPT 5 mg/kg组T／C(%)值分别为16.7、37.7和71.3,抑瘤率(%)分别为77.7、51.8和29.6,结果证实,MONCPT在20 mg/kg釉10 mg/kg剂量下都可以显著抑制A549肿瘤的生长,具有很好的抗肿瘤活性。2. MONCPT通过调控周期相关蛋白的表达阻滞肿瘤细胞于G2-M期：(1)流式细胞术分析显示MOCPT 100nM可诱导A549细胞G2／M期阻滞,并具有时效依赖性。MONCPT 1000nM可诱导PC3细胞G0／G1期阻滞,而MONCPT 10nM和100nM可诱导PC3细胞G2／M期阻滞；(2)MONCPT 1000nM作用PC3细胞后发现,CDK2,CDK4和cyclin D1蛋白表达下调,而MONCPT 10nM和100nM作用PC3细胞后发现,CDK7,CDK1和cyclin B1蛋白表达升高；(3)Western-blot结果显示,MONCPT可以通过上调p53蛋白,激活下游P21蛋白,从而下调CDK1蛋白的表达,最终使A549细胞停滞在G2／M期；同时实验结果表明MONCPT还可以通过下调CDK7、Cyclin H和Cdc25C蛋白表达,升高Weel蛋白表达以下调CDK1蛋白表达,最终导致A549细胞G2／M期阻滞。(4) MAPK和P13K/Akt信号通路在细胞周期调控中发挥重要的作用,结果表明MONCPT通过下调A549细胞中MAPK家族的p-ERK、JNK和p-AKT蛋白,上调p-P38和AKT蛋白参与G2／M期阻滞作用的调控；3. MONCPT表现出很强的抑制新生血管生成的活性：(1) MONCPT对EA.hy926细胞作用72小时的IC50为0.13±0.04μM; (2) AO/EB染色发现,随着MONCPT给药浓度的升高,EA.hy926细胞的凋亡率随之升高；(3)流式细胞术结果表明,EA.hy926细胞的凋亡率与MONCPT存在浓度依赖性关系；(4) MONCPT对鸡胚绒毛尿囊膜的新生血管形成具有明显抑制作用；(5) MONCPT 100nM和200 nM浓度可以显著抑制HUVEC内皮细胞的迁移；(6) MONCPT 50 nM、100 nM和200 nM给药浓度可以明显减少HUVEC细胞形成的完整血管腔数目,并且呈现一定的浓度依赖性。四.结论：(1) MONCPT具有广谱的体外抗肿瘤活性及高效的体内抗肿瘤生长活性；(2) MONCPT可能通过AKT、p53和MAPK通路阻滞肿瘤细胞于G2-M期；(3) MONCPT能显著抑制新生血管生成,增强抗肿瘤活性。