血脑屏障（blood-brain barrier,BBB）损伤是卒中病理过程的重要环节。其结果会导致外周血浸润脑实质,继而给中枢神经系统造成二次损伤。然而,BBB在卒中病理中的作用却鲜有报道。BBB是外周血与脑组织之间的生理屏障,其通过紧密连接调控物质交换,对维持中枢神经系统内环境稳态具有重要意义。Claudin-5（Cldn5）作为紧密链接蛋白家族的一员,是BBB通透性的分子开关。因此,探讨调控Cldn5表达与定位的机制,可作为卒中防治新的研究方向。自噬是溶酶体依赖性的细胞内源性保护途径,在卒中后脑血管内皮细胞中被激活。然而,自噬对BBB的作用缺乏深入探讨。因此,本研究在缺氧,血清饥饿条件下,探讨自噬对BBB的作用及其机制。第一部分:构建缺氧损伤BBB模型目的:探讨缺氧对BBB的作用。方法:本研究采用CoCl2或缺氧气体处理内皮细胞系与斑马鱼,以构建BBB缺氧模型;通过跨内皮细胞电阻,内皮屏障通透性与斑马鱼幼鱼脑血管造影等,检测缺氧对BBB通透性的作用;采用免疫技术（免疫荧光,免疫印迹,免疫电镜）,超分辨成像与流式等,分析缺氧对BBB的作用机制。结果:缺氧破坏BBB完整性,表现为其通透性增强,原因是Cldn5内在化转移与被降解。小结:细胞膜上的Cldn5内在化转移与缺失是缺氧损伤BBB的主要原因。第二部分:缺氧诱导的自噬与血脑屏障相关性的初步探讨目的:探讨缺氧损伤BBB内皮细胞中的自噬水平。方法:本研究采用电镜技术与过表达LC3-GFP的方法,观察缺氧后内皮细胞中的自噬流;采用免疫技术检测LC3与Cldn5的定位。结果:缺氧激活自噬,LC3与Cldn5共定位。小结:缺氧激活的自噬可能调控BBB完整性。第三部分:缺氧诱导的自噬对BBB的作用目的:探讨自噬对BBB完整性的作用机制。方法:本研究使用自噬抑制剂或激活剂联合缺氧处理内皮细胞层或斑马鱼,观察自噬对其通透性的作用;采用免疫、流式技术,探讨自噬对Cldn5的表达与定位,及细胞凋亡的作用。结果:短期缺氧诱导的自噬通过抑制细胞膜上的Cldn5重分布,清除聚集的Cldn5等方式,保护BBB完整性;长期缺氧激活的自噬导致BBB通透性增强。小结:短期（非长期）缺氧诱导的自噬保护BBB完整性。第四部分:饥饿诱导的自噬对内皮屏障的作用目的:探讨饥饿条件下自噬对内皮屏障完整性的作用。方法:本研究通过免疫技术与超分辨成像,分析血清饥饿诱导的自噬与Akt-mTOR-p70S6K通路之间的关系,探讨自噬对内皮屏障功能,Cldn5表达与定位的作用。结果:自噬在Akt-mTOR-p70S6K负调控下被激活,参与Cldn5降解,保护内皮屏障。小结:血清饥饿激活的自噬通过清除聚集的Cldn5保护内皮屏障。