济宁青山羊性早熟候选基因研究

来源 :扬州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:pkuericz
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缩短母羊的初情期,有助于降低后备母羊的生产投入成本。济宁青山羊是一个性早熟、高繁殖力山羊品种。本研究旨在寻找新的与山羊性早熟有关的基因,了解其作用机制,期望能够用于缩短山羊初情期的分子育种。1.根据牛UBA52基因序列,设计3对引物(U1-U3),分别扩增随机选取的济宁青山羊和辽宁绒山羊基因组DNA, PCR产物克隆测序,序列比对。结果显示仅在U3扩增产物中发现G63A和T181C突变。设计引物U4,利用PCR-RFLP技术分别在性早熟、高繁殖力品种(济宁青山羊、南江黄羊、马头山羊)和性晚熟、低繁殖力品种(辽宁绒山羊、内蒙古绒山羊、太行山羊)中检测上述位点的多态性,并分析2个突变位点对山羊性早熟和高繁殖力的影响。对于G63A位点,在济宁青山羊和南江黄羊中检测到GG、GA和AA3种基因型,在马头山羊、辽宁绒山羊、内蒙古绒山羊、太行山羊中只检测到GG和GA基因型;该突变位点不同基因型分布在性早熟品种和性晚熟品种间存在一定的差异;济宁青山羊GG、GA和AA基因型频率分别为0.53、0.44、0.03,AA型和GA型母羊平均产羔数分别比GG型多0.85只(P<0.05)和0.49只(P<0.05),AA型与GA型之间差异不显著(P>0.05)。对于T181C位点,在南江黄羊和内蒙古绒山羊中检测到CC、CT和TT3种基因型,在济宁青山羊、马头山羊、辽宁绒山羊、太行山羊中只检测到CC和CT两种基因型;该突变位点不同基因型分布在性早熟品种和性晚熟品种间没有明显差异;济宁青山羊CC和CT基因型频率分别为0.91和0.09,两种基因型个体间产羔数差异不显著(P>0.05)。本研究结果初步表明,UBA52基因63位点与山羊的性早熟可能存在一定关联,A等位基因可能是提高山羊产羔数的一个潜在有效的DNA标记。2.根据牛GDHl基因序列,设计7对引物(P1-P7),分别扩增随机选取的济宁青山羊和辽宁绒山羊基因组DNA, PCR产物克隆测序,序列比对结果显示仅在P6的扩增产物中发现A197C突变。设计引物P8,利用PCR-RFLP技术分别在性早熟、高繁殖力品种(济宁青山羊、南江黄羊、马头山羊)和性晚熟、低繁殖力品种(辽宁绒山羊、内蒙古绒山羊、太行山羊)中检测上述位点的多态性,并分析该突变位点对山羊性早熟和高繁殖力的影响。对于A197C位点,在南江黄羊中只检测到AA和AC基因型,而在其他5个品种中均检测到AA、AC和CC3种基因型;该突变位点不同基因型分布在性早熟品种和性晚熟品种间存在一定的差异;济宁青山羊AA、AC和CC基因型频率分别为0.69、0.26、0.05,AA型母羊平均产羔数分别比CC型和AC型分别多0.54只(P<0.05)和0.3只(P<0.05),AC型与CC型之间差异不显著(P>0.05)。本研究结果初步表明,GDHl基因197位点与山羊的性早熟可能存在一定关联,A等位基因可能是提高山羊产羔数的一个潜在有效的DNA标记。3.以幼年期Ⅰ(30+5d)、初情期(90±5d)的性早熟品种济宁青山羊和幼年期Ⅰ(30±5d)、幼年期Ⅱ(90±5d)和初情期(160-180d)的性晚熟品种辽宁绒山羊为研究对象,通过实时荧光定量PCR技术,研究UBA52和GDHl基因在下丘脑、垂体、卵巢、子宫和肾上腺组织中的表达规律,探索UBA52和GDHl基因与山羊性早熟的关系。研究发现UBA52基因在上述各发育阶段5个组织均表达,且各发育阶段时子宫中表达水平均极显著高于其他组织(P<0.01)。济宁青山羊垂体中UBA52基因表达量在初情期时极显著低于幼年期(P<0.01),而辽宁绒山羊UBA52基因表达量在幼年期Ⅱ时极显著高于幼年期Ⅰ,初情期时则极显著低于幼年期Ⅱ(P<0.01),推测垂体中UBA52基因影响了山羊的初情期。GDHl基因也在各发育阶段5个组织均表达。除了辽宁绒山羊初情期外,其他各阶段均为下丘脑中表达量高于另外四个组织。在卵巢中,初情期GDHl表达量均极显著高于幼年期表达量(P<0.01),推测是由于卵巢中GDH1基因表达量变化影响了初情期。
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