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研究背景:转基因食品(Genetically Modified Foods,GMF)是利用现代分子生物技术将某些生物的基因转移到其他物种中去,改造生物的遗传物质,使其在外观形态、营养价值、消费品质等方面向人们所需要的目标转变,以转基因生物为直接食品或为原料加工生产的食品就是“转基因食品”。传统观点认为转基因食品不会比普通食品给人类健康带来更多的威胁。然而,近年来越来越多的负面现象发生在食用转基因食品的人和动物身上,比如转基因食品很可能引起易感人群的过敏现象;又如与使用非转基因土豆饲养的小鼠小肠相比,使用转基因土豆饲养的小鼠小肠上皮发生了明显的改变;再如使用转基因大豆饲养的仓鼠生殖能力的下降等等,所有这些现象都促使我们不得不仔细考虑和重新评估转基因食品的安全性问题。在所有转基因作物中,转Bt基因作物占了绝大部分,其表达产物之一转基因蛋白Cry1Ab是使用最多分布最广的转基因蛋白之一,并且相对稳定,本实验中选择它作为转基因蛋白的代表,观察和研究其在实验中的作用。目的:探明Cry1Ab的生物组织分布情况并计算出其在血浆中的相关代谢动力学参数,明确其是否可以通过胃肠道吸收,是否有特异性的器官分布,并初步探查其相应机理,为转基因食品的安全性评估提供实验依据。方法:(1)采用同位素125I标记Cry1Ab并对标记结果进行质量控制,标记方法采用Iodogen法。(2)通过灌胃和尾静脉注射两种方式给予正常BALB/c小鼠125I-Cry1Ab,并于随后既定的时间点进行采血、采集图像和各器官组织中125I-Cry1Ab的测量。(3)进行Cry1Ab与生物组织芯片和IEC-6细胞的结合实验,并用Western blot技术对组织或器官裂解液中的Cry1Ab进行鉴定,最后用LigandBlot方法寻找小鼠组织或器官裂解液中可能存在的Cry1Ab受体。结果:(1)标记产物125I-Cry1Ab即刻放射性化学纯度达95.7%。在体外及模拟体内环境条件下均具有较好的稳定性,可以满足下一步示踪实验的要求。(2)无论灌胃还是尾静脉注射给药,125I-Cry1Ab在肝、肺、脾、胃、肠道、性腺和肾脏都有较高的分布。但在大脑中分布极低。灌胃给药时,125I-Cry1Ab在血浆中约5h达到峰浓度,随后开始下降,至27h时基本清除。尾静脉注射给药时,125I-Cry1Ab的代谢符合方程:C=2495e-1.99t+702e-0.10t,分为分布相和消除相两个时相,分布相半衰期和消除半衰期分别为0.35h(T1/2α)和6.79h(T1/2β)。灌胃给药的绝对生物利用度为28.68%。(3)生物芯片中的胃、小肠等组织以及IEC-6细胞与Cry1Ab均有较强的结合活性,用Western blot技术鉴定结果认为是Cry1Ab的特异性结合,这与上一部分中动物实验的结果相一致。最后用Ligand Blot的方法寻找到了小鼠组织和器官中存在的Cry1Ab受体。结论:本实验证实了转基因蛋白Cry1Ab可以通过胃肠道整体吸收到体内,并在肝、肺、脾、胃、小肠、性腺和肾脏等器官有较多分布,但不能通过血脑屏障,主要的排泄器官是肾脏。Cry1Ab通过两种给药方式吸收后,其在血液中的代谢动力学相似,符合二室模型。然而,具有特定的吸收、分布(尤其是在胃肠道和性腺中的大量分布)代谢特征的转基因蛋白进入机体后造成的后果目前仍不明了,尚需进一步的研究。