应用染色体步行技术克隆三孢布拉氏霉乳清酸核苷—5’—单磷酸脱羧酶基因及其序列分析

来源 :中国科学院大学(中国科学院武汉病毒研究所) | 被引量 : 2次 | 上传用户:dongjuanqiu
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根据对卷枝毛霉(Mucor circinelloides),布氏须霉(Phycomyces blakesleeanus),Rhizopus niveus,Rhizopus arrhizus ,Rhizomucor pusillus的乳清酸核苷-5’-单磷酸脱羧酶基因核酸序列的同源性分析,在第3个外显子内根据卷枝毛霉基因序列设计一对引物,以三孢布拉氏霉(Blakeslea trispora)基因组DNA为模板进行PCR扩增,得到一长度约为500bp的产物。经过同源性分析证明该产物为三孢布拉氏霉乳清酸核苷-5’-单磷酸脱羧酶基因片段。在此基础上,采用抑制性PCR扩增技术,进行染色体步行,分别克隆出染色体上相邻的DNA片断,测定了基因的全序列,并对该序列进行了分析。结果表明,在外显子区域核酸序列与卷支毛霉,Rhizopus arrhizus,Rhizopus niveus同源率分别为82%,81%,79%。该基因可作为构建三孢布拉氏霉转化系统的标记基因。
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