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非结核分枝杆菌(NTM)是除结核分枝杆菌复合群MTBC)、麻风分枝杆菌(M.leprae)外的一类分枝杆菌。NTM与MTBC均可引起肺部以及其它部位病变,而且临床症状相似,鉴别诊断困难,所以分枝杆菌菌种鉴定对于疾病的诊断、治疗及预后意义重大。以细菌培养为基础的传统生化鉴定方法,费力耗时,结果提供不及时,有时结果不准确。随着分子生物学的发展,出现了众多以分子生物学技术为基础的鉴定方法,如PCR-SSCP、 PCR-RFLP、DNA探针、DNA芯片、DNA直接测序等,以其快速、高效、特异等优点而受到青睐：本研究采用从国内收集的NTM分离株,探讨基于hsp65和rpoB的PCR-RFLP对NTM分离株菌种鉴定的应用价值。1hsp65-和rpoB-PCR-RFLP在非结核分枝杆菌临床分离株鉴定应用中的效果评价用PNB/TCH试验和多位点PCR从临床分离株鉴定出NTM后,以hsp65测序作为金标准,用hsp65-和rpoB-PCR-RFLP将NTM鉴定至种。结果,收集的130株省级结核病院鉴定为NTM的临床分离株中,经我们进一步用PNB/TCH试验和多位点PCR鉴定,22株为MTB,108株为NTM。PNB/TCH试验与多位点PCR结果无统计学差异(P>0.05)多位点PCR所需时间较短。108株NTM中,经hsp65-和rpoB-PCR-RFLP鉴定为胞内分枝杆菌53株(49.07%)、脓肿分枝杆菌23株(21.30%)、鸟分枝杆菌19株(17.59%)、马赛分枝杆菌和戈登分枝杆菌各4株(3.70%)、首尔分枝杆菌、熊本分枝杆菌、偶发分枝杆菌、乳牛分枝杆菌和莫娜分枝杆菌各1株(0.93%)。福建NTM肺病病原种类繁多,以胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌和鸟分枝杆菌为主。以hsp65基因测序结果为标准,hssp65PCR-RFLP的敏感性为99.07%,特异性为100%,rpoB PCR-RFLP的敏感性为98.15%,特异性为100%。hsp65PCR-RFLP与rpoB PCR-RFLP结果差异无统计学意义(P>0.05)2动物标本分枝杆菌的分离与鉴定用中和离心法消化动物标本,分别接种L-J培养基和MGIT960培养基进行分枝杆菌分离培养。用PNB/TCH试验、hsp65DNA直接测序、hsp65-和rpoB-PCR-RFLP、多位点PCR和Spoligotyping进行分离株菌种鉴定。从110份动物标本中共分离到29株抗酸杆菌,经鉴定,19株为NTM,包括偶发分枝杆菌11株(57.89%)、脓毒分枝杆菌5株(26.32%)、胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌和莫娜分枝杆菌各1株(5.26%),3株为MTB,7株为鼻疽诺卡菌。