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目的:
探讨丹皮酚(paeonol,Pae)单独及联合5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)对人食管癌EC9706细胞的增殖抑制作用及可能机制。
方法：
采用6种浓度的Pae(7.81、15.63、31.25、62.5、125、250mg/L)、3种浓度的5-FU(12.5、25、50mg/L)及Pae(31.25mg/L)和5-FU(12.5mg/L)联合分别处理EC9706细胞24、48、72h,同时设对照组,采用MTT法检测各个时间段细胞的增殖情况；倒置显微镜下观察细胞形态学变化；采用流式细胞术检测4种浓度的Pae(31.25、62.5、125、250mg几)处理EC9706细胞72h后细胞周期的变化；采用流式细胞术检测经Pae(31.25mg/L)、5-FU(12.5mg/L)单独和联合作用72h后细胞的凋亡率；采用免疫细胞化学法检测经Pae(31.25mg/L)、5-FU(12.5mg/L)单独和联合作用48h后细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达情况。
结果：
Pae、5-FU可明显抑制EC9706细胞增殖,并随着浓度的增加和作用时间的延长而增强(同一时间段各浓度组之间比较除24h、48h:Pae7.81mg/L组vs Pae15.63mg/L组,同一浓度组各时间段之间比较除Pae125mg/L:48h vs72h,P>0.05外,余均P<0.05),Pae与5-Fu联合用药比单用其中任意一种药物抑制效果更明显(P<0.05)；倒置显微镜下观察Pae和5-FU作用于EC9706细胞后,细胞数量减少,形态学发生明显变化,细胞体积缩小,出现细胞碎片；Pae作用后EC9706细胞中G0/G1期和G2/M期细胞比例下降,S期细胞比例上升(Pae125mg/L组与对照组比较:G0/G1期21.18±2.28％ vs62.17±5.23％、G2/M期O.76±0.54％vs9.92±3.10％、S期78.06±2.82％vs27.91±2.13％,P<0.05)；Pae、5-FU均可诱导EC9706细胞凋亡,联合用药组较单药组诱导凋亡的作用更为明显(凋亡率:33.25±1.02％vs6.92±0.7096、17.83±1.26％,P<0.05)；Pae、5-FU可下调EC9706细胞中Bcl-2蛋白表达,同时增强EC9706细胞中Bax蛋白的表达,联合用药组较单药组作用更为明显(Bcl-2蛋白:2.21±0.14 vs5.67±0.30、4.22±0.34；Bax蛋白:8.55±0.33 vs3.90±0.27、6.28±0.26,P<0.05)。
结论：
Pae或5-FU可抑制人食管癌EC9706细胞的增殖,且呈明显的时间、剂量依赖性,联合用药后对EC9706细胞的增殖抑制作用进一步增强,表现出明显的协同作用；Pae和5-FU的协同作用可能是通过阻滞细胞周期,下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达,诱导食管癌细胞凋亡实现的。