高压氧对大鼠肠粘膜缺血再灌注损伤所致细胞凋亡的影响

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目的观察在小肠缺血/再灌注不同时期应用高压氧(Hyperbaric Oxygen,HBO)治疗对肠粘膜细胞调亡的作用,并探讨其作用机制。方法采取大鼠肠系膜上动脉(SMA)钳夹缺血1h,松钳夹再灌注1h,建立大鼠小肠缺血/再灌注损伤模型。健康雄性SD大鼠40只,体重250~300克,完全随机分成4组。(1)缺血再灌注组(I/R):麻醉剖腹暴露肠系膜上动脉,钳夹造成缺血1h,松夹造成再灌注1h;(2)高压氧预处理组(HBO-P):预先给予高压氧1h后再造成I/R 1h;(3)缺血期高压氧组(HBO-I):麻醉剖腹缺血1h期间同时给高压氧,再灌注1h;(4)再灌注期高压氧组(HBO-R);麻醉剖腹缺血1h,再灌注1h期间给高压氧;采用免疫组化法检测大鼠小肠组织中半胱氨酸天门冬氨酸特异蛋白酶(Caspase-3)的表达且在光镜下观察大鼠肠道粘膜上皮细胞的形态学改变和采用比色法检测肠道组织匀浆ATP酶含量。结果一、大鼠小肠组织Caspase-3含量比较由HBO-I组、HBO-P组、HBO-R组、到I/R组大鼠小肠组织Caspase-3光密度值呈增高趋势。HBO-I组对比HBO-P组和HBO-R组、I/R组其Caspase-3光密度值明显降低,其组间差异比较有统计学意义(P<0.05)。HBO-P组对比HBO-R组、I/R组明显降低,其组间差异比较有统计学意义(P<0.05)。HBO-R组对比I/R组虽然也降低,但其组间差异比较无统计学意义(P>0.05)。二、大鼠小肠组织匀浆ATP酶含量比较由I/R组到HBO-R组、HBO-P组、HBO-I组组织匀浆ATP酶含量呈增高趋势。HBO-I组对比HBO-P组和HBO-R组以及I/R组其ATP酶含量明显增高,其组间差异比较有统计学意义(P<0.05)。HBO-P组对比HBO-R组以及I/R明显增高,其组间差异比较有统计学意义(P<0.05)。HBO-R组对比I/R组也有所增高,其组间差异比较无统计学意义(P>0.05)。结论高压氧、小肠I/R损伤和小肠粘膜上皮凋亡之间存在联系;高压氧治疗可以维持粘膜上皮细胞能量代谢,减少ATP耗竭,减轻I/R损伤小肠粘膜上皮凋亡;在缺血期和缺血前应用高压氧治疗显示有益结果,特别是在缺血期应用高压氧效果最好,再灌注期应用高压氧无效。
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