癌症是威胁人类生命的主要疾病之一，目前仍缺乏有效的治疗手段。肿瘤特异性增殖腺病毒（溶瘤腺病毒）是一种能够特异性地感染肿瘤细胞或特异性地在肿瘤细胞中复制、增殖，最终导致肿瘤细胞裂解的腺病毒。肿瘤靶向的基因病毒治疗以溶瘤腺病毒为载体，携带各种治疗基因，联合基因治疗与病毒治疗的优势增强抗癌能力，在癌症治疗领域显现出极大的潜力。　　 目标：本文初步探讨携带抑癌基因wif-1的双靶向溶瘤腺病毒的抗癌作用，并研究携带wif-1的双靶向溶瘤腺病毒在体外试验中对肺癌细胞的杀伤能力。同时期望构建携带VA RNA基因缺失的新型溶瘤腺病毒，使该类病毒只能在肿瘤细胞中复制，而在正常细胞中复制缺陷。　　 原理和方法：Wnt信号通路在胚胎发育、细胞增殖和分化过程中起决定性作用，该通路异常导致的下游基因的异常表达对肿瘤发生、恶化同样具有重要作用。有文献报道80％的肺癌组织中WIF-1蛋白(WNT inhibition factor1，WIF-1)表达降低，该蛋白可抑制Wnt信号通路的活化，进而可以抑制癌细胞的生长。为达到有效抑制肺癌的目的，本试验构建了内源表达wif-1的双靶向溶瘤腺病毒AdCN205-wifl，并在体外试验中评估该病毒的抗癌效果，观察病毒携带该基因后是否能够特异性的在肿瘤细胞中复制，是否能够高效地表达外源基因，从而能够更好地发挥病毒治疗和基因治疗的双重抗癌效果。　　 当腺病毒感染细胞后将激活细胞内的防御机制，该机制可阻止病毒复制。而腺病毒内源转录产生的VAⅠ和VAⅡRNA可阻断细胞内源的防御机制而使病毒顺利复制。如果将VAⅠ和VAⅡ基因从腺病毒基因组中删除，腺病毒感染细胞后就不能自行复制，但是肿瘤细胞中高活性的转录因子或Ras过度活化可以弥补VA基因的缺失。本实验通过删除腺病毒VAⅠ和VAⅡ基因而使病毒具有肿瘤特异性增殖的能力，期望构建一种新型的肿瘤特异性腺病毒。　　 本文的第一章详述了该新型溶瘤腺病毒的构建策略以及构建流程，商榷克隆质粒的构建并检验其正确性，并使用构建成功的质粒系统包装新型的溶瘤腺病毒。　　 结果：实验结果显示，溶瘤腺病毒AdCN205-wifl在细胞中可以高效表达WIF-1，该蛋白的表达并没有明显影响溶瘤腺病毒在肿瘤细胞中的复制。且AdCN205-wifl针对肺癌细胞具有较强的杀伤能力，表现出了明显的抗肿瘤能力。　　 质粒鉴定结果显示，我们已成功构建出含有VA RNA基因缺失的腺病毒穿梭质粒以及含有该缺陷的腺病毒骨架质粒。　　 结论：在AdCN205-wifl感染的细胞中，wif-1基因的顺利表达并不影响病毒复制，而且腺病毒主要内源启动子启动外源基因高效转录的作用大大提高了治疗基因的表达量，保证了病毒基因治疗的安全性和有效性。体外实验证实AdCN205-wifl疗效确切、安全性高，具有良好的临床应用前景，为肺癌以及其他肿瘤提供了新的治疗方法。　　 携带VA RNA基因突变的新型溶瘤腺病毒是一种具有广阔前景的新型病毒，我们已构建出含有VA RNA基因突变的病毒包装质粒，进一步优化实验方案将包装出病毒。