论文部分内容阅读
目的肝细胞癌(简称肝癌)是最常见和恶性程度最高的肿瘤之一，位居全球恶性肿瘤发病率的第5位，在我国为恶性肿瘤死因第2位，对我国人民健康造成极大的危害。近年来的研究表明，锂盐具有抑制肿瘤细胞增殖、影响癌基因表达及诱导凋亡的作用。本课题通过体内、体外实验研究了氯化锂(LiCl)对小鼠肝癌细胞H22生长增殖的影响，并探讨其作用机制。方法体外实验，为观察LiCl对H22肝癌细胞生长增殖的影响，用不同浓度的LiCI处理H22细胞36h后，用MTT法检测LiCI对H22细胞的增殖情况；通过Hoechst染色法，在荧光显微镜下观察在LiCl作用下，H22细胞是否发生凋亡；用流式细胞仪检测LiCI是否能够诱导H22细胞凋亡；采用RT-PCR法检测LiCI对H22细胞中p21、Bax、Bcl-2mRNA表达的影响。体内实验，建立小鼠H22肝癌细胞实体瘤模型，观察氯化锂对荷肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用；从肿瘤重量、体积、组织病理学以及组织超微结构来观察LiCl对肝癌的抑制作用；采用RT-PCR法检测LiCl对肝癌组织中p21、Bax、Bcl-2mRNA表达的影响；采用Westernblot法检测不同组别肝癌组织中p53、p2l、Bax蛋白表达的影响。结果采用MTT法观察LiCI对H22细胞增殖的影响，结果表明LiCl对H22细胞的增殖具有一定的抑制作用，并且呈现一定的量效关系；采用荧光显微镜和流式细胞仪对不同浓度LiCl处理的H22细胞进行观察，从形态和生化两个方面证实了LiCl可以诱导H22细胞产生凋亡；RT-PCR方法检测，结果表明不同浓度的LiCI处理H22细胞36小时后，细胞中的p21、BaxmRNA表达与对照组相比明显升高，并呈现浓度依赖关系：而Bcl-2mRNA表达与对照组相比无明显变化。LiCl对荷肝癌小鼠肿瘤的生长具有一定的抑制作用，其中氯化锂处理组的中浓度组和高浓度组抑瘤率分别达到50．0％和60．7％，；组织病理学检查表明LiCl处理组肝癌组织切片中可见细胞形态变小，胞核浓缩的程度严重，甚至破裂，大量细胞发生出血坏死；肿瘤组织电镜下可见凋亡细胞和凋亡小体；RT-PCR方法检测，结果表明一定浓度的Licl可使肝癌组织中的p21、BaxmRNA表达升高，并可下调Bcl-2mRNA表达；Westernblot方法检测，结果表明一定浓度的Licl可使肝癌组织中的p53、p2l、Bax蛋白表达升高。结论本实验研究结果提示LiCI在体内和体外均可通过诱导细胞凋亡对小鼠H22肝癌细胞增值起抑制作用，且抑制作用在一定范围内随着作用浓度的增加而增强；其机制可能是通过p53依赖途径诱导细胞凋亡的方式来发挥抗小鼠H22肝癌作用。