研究背景和目的在体内或体外实验中都有证据表明,高浓度游离饱和脂肪酸环境会对心肌细胞产生脂毒性最终引起心肌细胞凋亡。鉴于氧化应激对细胞凋亡的诱导作用,抑制活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）诱导的细胞凋亡有望成为治疗心血管疾病的新靶点。近期研究已较好证明了因肥胖导致的脂毒性和心力衰竭之间的关系,而自噬在其过程中可能发挥重要作用。作为一种从中草药淫羊藿中提取的黄酮苷类化合物,淫羊藿苷（Icariin）心血管保护作用已被证实,但该效应的分子机制尚未明确。心肌细胞凋亡是心衰中心脏重构的组成部分。本研究主要通过采用体外以高浓度棕榈酸（Palmitic Acid）诱导大鼠心肌细胞凋亡,探讨氧化应激和自噬在细胞死亡中的作用,同时探讨淫羊藿苷抑制棕榈酸诱导细胞凋亡效应及氧化应激和自噬的作用机制。方法1.以不同浓度的棕榈酸分组处理H9c2细胞24小时,并通过CCK-8和hoechst33342荧光染色分别检测其存活率及凋亡情况,以蛋白质免疫印迹法（Western blot）对Bax、Bcl-2、caspase-3的凋亡相关蛋白表达进行检测。通过CCK-8结果确定构建凋亡模型的最佳浓度,以200μM棕榈酸分别干预12h、24h、48h后对其存活率进行检测,并以ROS检测试剂盒测定不同浓度棕榈酸干预后各组细胞内活性氧水平。应用Western Blot检测不同浓度棕榈酸干预后自噬相关蛋白LC3 II/LC3 I、P62和Beclin 1等的蛋白表达。2.在不同浓度的淫羊藿苷条件下对H9c2细胞预处理1 h,后加200μM棕榈酸继续培养24 h。检测不同组的存活率、凋亡率。检测淫羊藿苷和棕榈酸共处理后细胞内的ROS和SOD水平。检测凋亡和自噬相关蛋白的表达。3.分别加入2 m M N-乙酰半胱氨酸（NAC）和5 m M自噬抑制剂3-Methyladenine（3-MA）,预处理30分钟后与200μM PA继续培养24小时。检测凋亡率和细胞存活率,检测ROS及SOD水平,对自噬相关蛋白水平进行检测。结果1.与对照组相比,随着时间和浓度的增加棕榈酸处理组的存活率呈现下降趋势,细胞凋亡率上升,Bax、cleaved caspase-3的表达出现显著升高,而Bcl-2表达则低于对照组。棕榈酸浓度为200μM时细胞存活率约为50%。淫羊藿苷预处理后,与单纯PA组相比,细胞存活率明显提高,凋亡率下降。Bax、cleaved caspase-3的表达与单纯PA组相比明显降低,Bcl-2相比明显增高2.与对照组相比,棕榈酸处理后细胞内提高了活性氧（ROS）水平,降低了抗氧化酶（SOD）的活性,而淫羊藿苷预处理后,与单纯PA组相比,保护性降低了ROS水平,提高了SOD的活性。3.蛋白印迹结果表明,PA处理增加了LC3 II的蛋白表达,并且降解了P62蛋白。经不同剂量的淫羊藿苷处理后的细胞中Beclin1和LC3 II蛋白表达水平均有所降低,而P62蛋白表达水平有所增加,其中以7.5μM和15μM组效果最为显著。4.CCK-8实验结果显示,NAC和3-MA预处理可以提高PA诱导的H9c2细胞的细胞活性。hoechst33342检测结果表明,NAC和3-MA可以减少PA引起的细胞凋亡。而蛋白免疫印迹显示,3-MA和NAC均抑制了自噬现象。ROS和SOD检测结果表明,NAC抑制了氧化应激水平,而3-MA不能改善氧化应激水平。结论PA以时间和剂量依赖性诱导心肌细胞凋亡,并且在凋亡的同时伴随自噬的过度激活和活性氧造成的氧化应激水平增高;而淫羊藿苷以减轻氧化应激及由氧化应激诱导的自噬的方式实现细胞凋亡通路的抑制,提高细胞的存活率。