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目的:本研究通过检测通窍益智颗粒对血管性痴呆(vascular dementia,VaD)大鼠行为学和海马CA1区神经元凋亡的影响,以及对cAMP/PKA-CREB信号通路关键因子、下游BDNF、突触后NMDA受体亚基GluN1、GluN2B以及AMPA受体亚基GluA2表达的调节,探讨开通玄府法治疗血管性痴呆模型大鼠的潜在作用机制。方法:1.造模及分组:使用Morris水迷宫筛选学习记忆能力相近的清洁级SD大鼠,随机分为假手术组和手术组,使用双侧颈总动脉永久结扎法(Permanent bilateral common carotid artery ligation method,又称2-VO法)制备血管性痴呆大鼠模型,造模30天后行Morris水迷宫检测,合格大鼠纳入实验,随机分为模型组、尼莫地平组、通窍益智颗粒高、中、低剂量组(以下简称中药组),每组10只。2.给药方法:根据人与动物等效剂量换算,尼莫地平组给予尼莫地平混悬液6.25mg/kg.d灌胃,中药高、中、低剂量组分别予以通窍益智颗粒浓缩液24.8g/kg.d、12.4g/kg.d、6.2g/kg.d灌胃,模型组和假手术组给予等量(3ml)蒸馏水灌胃;2次/d,持续30天。3.标本取材:灌胃完成后行Morris水迷宫实验检测大鼠行为学,完成后随机选取5只大鼠,生理盐水心脏灌注后,断头于冰上迅速取新鲜海马组织用于ELISA、Western Blot实验;另外5只予以4%多聚甲醛PBS心脏灌注后取脑,固定后石蜡包埋切片,用于TUNEL和免疫组化实验。4.指标检测:Morris水迷宫检测定位航行和空间探索成绩,评价学习、记忆能力;TUNEL法检测大鼠海马CA1区神经元凋亡率;ELISA法检测大鼠海马cAMP含量的改变;免疫组化法检测海马BDNF的表达;Western Blot法检测PKA C-α、pCREB、GluN1、GluN2B以及GluA2等蛋白的表达变化。结果:1.行为学:与假手术组相比,模型组潜伏逃避期(escape latency,EL)显著延长,穿过原平台次数与第Ⅲ象限停留时间明显减少(P<0.05);与模型组比较,尼莫地平组和中药高、中、低剂量组EL缩短,穿过原平台次数与第Ⅲ象限停留时间均有不同程度提高(P<0.05),其中以中药高剂量组改善最为明显(P<0.05)。2.海马CA1区神经元凋亡率:模型组较假手术组神经元凋亡率显著升高(P<0.05);与模型组比较,各给药组神经元凋亡率均有不同程度降低,其中中药高剂量组较中药中、低剂量和尼莫地平组更低(P<0.05)。3.BDNF表达:BDNF阳性细胞表现为神经元胞浆内呈棕黄色沉淀。模型组较假手术组海马CA1区神经元BDNF表达明显减少(P<0.05);各给药组较模型组均有不同程度上调,其中以中药高剂量组BDNF表达升高最为明显(P<0.05)。4.cAMP表达:与假手术组比较,模型组海马神经元胞浆内cAMP含量显著降低(P<0.05);相比模型组,尼莫地平组与中药各剂量组cAMP表达均明显上升(P<0.05),其中以中药高剂量组升高最为明显(P<0.05)。5.PKA和pCREB蛋白表达:模型组大鼠海马神经元内PKA和pCREB的表达较假手术组显著下调;给药后,中药组和尼莫地平组PKA及pCREB含量均升高(P<0.05),以中药高剂量组升高最为显著(P<0.05)。6.GluN1、GluN2B以及GluA2蛋白表达:与假手术组相比,模型组海马神经元突触后GluN1、GluN2B以及GluA2蛋白显著下调,给药后各组上述蛋白表达均有提高(P<0.05),其中以中药高剂量组最为明显(P<0.05)。结论:1.通窍益智颗粒可显著改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力。2.通窍益智颗粒可显著抑制海马CA1区神经元凋亡,增加cAMP、PKA及pCREB的蛋白水平,并介导下游BDNF表达,发挥神经保护作用。3.通窍益智颗粒对VaD大鼠突触后GluN1、GluN2B以及GluA2表达有一定上调,可促进脑缺血后突触的正常结构恢复、提高传递效能。且上述作用均表现出一定的剂量依赖性。