草菇诱变育种及转基因草菇遗传稳定性研究

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tc2020
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草菇生物转化率低,子实体不耐低温贮藏,菌种容易变异,这些缺陷严重制约了草菇产业的发展。草菇栽培品种的改良成为人们十分关注的课题。在基因工程改造的基础上,通过对转基因草菇的诱变育种比传统的组织分离、孢子分离等选育方法更有可能获得优良的新菌株。然而越来越多的遗传分析表明,外源基因在宿主内的整合和遗传是非常复杂的,与宿主自身遗传特点息息相关。   本研究在已获得的转抗冻蛋白基因草菇基础上,对其保藏、继代以及有丝分裂过程中外源基因的遗传特性,以及菌丝的生长、出菇等生物学性状进行分析;同时对优良菌株进行担孢子与子实体菌褶的诱变,为草菇的基础遗传和育种研究提供一些事实依据。   本研究的主要结果如下:   (1)确定了草菇担孢子和菌褶在EMS、DES、UV三种处理下的诱变条件。   (2)对诱变菌株进行0℃低温初筛,拮抗实验和实验室栽培出菇,结果发现:低温初筛后5株0℃致死时间稳定且超过48h;6株EMS、DES孢子诱变菌株与对照有比较明显的拮抗作用;单孢诱变出菇菌株比例少,未选育出优良菌株;菌褶诱变得到4株优良菌株(Em-8、Em-9、Em-16、Em-18),生物转化率分别为21.33%、24.67%、28.67%、23.00%,均高于对照菌株(19.67%)。   (3)对4株高产诱变株的菌丝生长、出菇情况、子实体相关性状进行分析和分子鉴定,结果表明:高产菌株菌丝均匀,后期会产生厚垣孢子;在32℃菌丝生长速度均显著高于对照;出菇时间比对照提前1-2天;出菇后组织分离后代的菌丝生长与生物转化率稳定;16℃子实体贮藏72h,Em-8、Em-18贮藏品质均高于对照;在菌膜厚度上,Em-18与对照差异显著;AFLP结果显示3株高产诱变株与对照有差异带,说明在基因水平上存在差异。   (4)转afp基因的遗传稳定性分析显示:Tl代单孢菌株afp基因阳性菌株占11%;T2代单孢菌株中afp基因阳性菌株占5%;T3代单孢分离菌株没有检测到afp基因的存在。T0代菌株液体石蜡保藏一年,菌丝退化严重,检测不到afp基因;T1、T2代转基因草菇在18℃保藏3个月或继代3次以上后,菌丝均检测不到afp基因。   (5)对转基因单孢后代菌丝形态和生长速度研究结果表明:转基因Tl、T3代同一菌株单孢后代菌丝形态归成3类,与传统的非转基因草菇的研究结果相似。转基因T2代同一菌株单孢后代的菌丝形态一致,不同菌株单孢后代的菌丝形态差异明显,与非转基因的结果明显不同。   (6)转基因后代出菇实验显示:75%的T1代单孢菌株在出菇时间显著早于对照2-3天。T1S211-76 (19.5%),T1S211-78 (29.5%)在生物转化率上都高于对照(1 8.5%)。T2代单孢出菇时间晚于对照2-3天,菇蕾数多且显著高于对照。保藏半年后再次出菇,菌株出菇时间延长,生物转化率下降。
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