【目的】闭合蛋白Occludin是组成紧密连接以及维持血脑屏障(Blood-brain barrier,BBB)完整性的重要分子之一。前期研究证实,BBB通透性增高是急性缺血性脑卒中(Acute ischemia stroke,AIS)溶栓再灌注治疗后出现脑出血并发症的重要原因,脑缺血后紧密连接蛋白Occludin发生快速降解,但Occludin降解对于脑微血管内皮细胞在缺血再灌注条件下存活的影响尚未明确。本研究旨在通过体外实验证明,Occludin的表达水平降低将增加大脑微血管内皮细胞对缺血再灌注的易损性,促进细胞的死亡。【方法】体外培养大脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,b End.3),并通过使用Occludin si RNA以及Occludin AAV分别得到Occludin缺陷以及过表达的内皮细胞。采用细胞氧-葡萄糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)模型模拟体外缺血缺氧,并通过复氧或TNF-α刺激处理模拟溶栓再灌注条件。通过测量乳酸脱氢酶(LDH)释放、TUNEL染色、流式细胞仪分析和检测炎症小体活化等方法来评估细胞凋亡和焦亡,免疫印迹法检测信号分子的蛋白表达。【结果】通过以上实验方法,我们发现:(1)抑制Occludin降解可减轻OGD/R诱导的内皮细胞凋亡;(2)敲低Occludin可促进TNF-α诱导的内皮细胞凋亡;(3)敲低Occludin会加剧TNF-α诱导的内皮细胞焦亡;(4)过表达Occludin抑制TNF-α刺激诱导的内皮细胞凋亡与焦亡;(5)抑制Occludin降解或过表达Occludin均可上调OGD/R处理后内皮细胞c-Yes及其下游生存信号分子的表达。【结论】这些数据表明,脑缺血导致的Occludin缺失促进BBB内皮细胞对于死亡刺激的敏感性,从而加速卒中条件下的BBB破坏,提示Occludin可能成为缺血性脑卒中治疗重要靶点。