猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcinereproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）是一种能引起母猪繁殖障碍和仔猪发热死亡的单股正链RNA病毒,严重危害全球养猪业的健康发展。PRRSV的致病及免疫逃逸机制复杂,且其基因组具有非常高的变异性,给该病的防控带来极大的挑战。纳米硒（selenium nanoparticles,SeNPs）是一种单质硒,具有毒性低、抗氧化、抗菌和抗肿瘤等生物学活性,而机体内硒蛋白则与病毒的复制和致病性密切相关,纳米硒则可促进机体内硒蛋白的形成和表达。因此,本研究制备良好生物相容性的壳聚糖纳米硒（CS-SeNPs）,探究CS-SeNPs抑制PRRSV复制的分子机制。1.化学还原法制备粒径均匀且分散良好的CS-SeNPs首先,本研究通过化学还原法制备了具有良好生物相容性的CS-SeNPs。以壳聚糖（CS）为保护剂和表面修饰剂,抗坏血酸（VC）还原亚硒酸钠（Na2Se O3）,常温条件下超声2 h,合成CS-SeNPs。利用透射电子显微镜,拉曼图像-扫描电子显微镜联用仪,电感耦合等离子体质谱仪,马尔文激光粒度仪等对CS-SeNPs进行表征分析。结果表明,CS-SeNPs眼观为橙红色透明液体,电镜下呈均匀分散颗粒状,平均粒径为90±13 nm。相比无CS修饰的纳米硒（SeNPs）,CS-SeNPs镜下呈均匀分散的规则球状,电位增加到31.4±0.99 m V,且30 d内未见明显沉淀。CS-SeNPs在Marc-145细胞上IC50为74.17μmol/L,为后续试验筛选到适宜浓度。2.CS-SeNPs能显著抑制PRRSV的复制其次,本研究发现CS-SeNPs具有抑制PRRSV复制的能力。本试验设置空白细胞组（Mock）、CS-SeNPs对照组（CS-SeNPs）、PRRSV病毒对照组（PRRSV）和CS-SeNPs+PRRSV组（CS-SeNPs+PRRSV）。在病毒感染24和48 h后,分别用荧光显微镜观察GFP荧光强度,用real-time PCR测定培养上清中病毒基因组拷贝数,用TCID50方法测定培养上清中病毒滴度,用Western blot法检测PRRSV N蛋白的表达。结果表明,与PRRSV感染组相比,CS-SeNPs+PRRSV组的GFP荧光强度显著减弱,细胞上清中病毒基因组拷贝数和TCID50滴度也显著减少（P＜0.01）,PRRSV N蛋白表达极显著降低（P＜0.01）。3.CS-SeNPs减弱PRRSV诱导的细胞凋亡从而抑制病毒复制最后,本研究初步解析CS-SeNPs抑制PRRSV复制的作用机制。本试验设置与第二章同样分组。在病毒感染24和48 h后,分别检测各组细胞中ROS、H2O2、GSH和GSH-Px水平,用流式细胞仪检测细胞凋亡水平,Western blot检测凋亡相关蛋白（JNK、caspase-3和PARP）的表达情况。结果表明,与PRRSV组相比,CS-SeNPs+PRRSV共处理能显著提高细胞GSH水平和GSH-Px活力（P＜0.01）,极显著降低细胞中ROS和H2O2水平（P＜0.01）。CS-SeNPs能极显著抑制由PRRSV诱导的细胞凋亡（P＜0.01）。PRRSV处理会引起细胞JNK的磷酸化水平升高,促进caspase-3及PARP的切割。而在CS-SeNPs+PRRSV组中相关凋亡蛋白的表达量均极显著下降（P＜0.01）。综上所述,本研究采用化学还原方法制备了均匀分散且性质稳定的CS-SeNPs,首次证明了CS-SeNPs可以提高细胞抗氧化能力,并通过ROS/JNK信号通路抑制PRRSV诱导的Marc-145细胞凋亡,从而抑制PRRSV的复制。为PRRSV的预防和控制提供了理论依据。