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背景与目的肺癌是目前全球发病率最高、死亡率增长最快的恶行肿瘤,由于近年国内大气污染日趋严重,国人感染肺部疾病甚至肺癌的风险大大增加。美国肺癌患者相对的只有18%的5年生存率,预后效果差主要是因为肿瘤易发生侵袭和转移。当前的研究数据显示,约80-90%的肺癌死亡病例的病因是肿瘤转移。因此,研究肺癌侵袭转移的具体机理,然后制定相应的预防、治疗措施,具有重大的临床价值和社会意义。肺癌侵袭转移是一个多基因、多步骤、连续性、渐进式动态进程,涉及多个信号通路的功能紊乱和关键基因的结构、功能变异。最新研究成果表明,Hippo信号通路的下游靶标,共转录激活子TAZ可以激活多种原癌基因的表达,在肿瘤侵袭转移过程中扮演了重要角色,为临床治疗研究提供了新的药物靶点和治疗策略,是近年来癌症研究的热点问题。我们前期的研究结果显示,肿瘤细胞中乳酸的不断积累与肿瘤的转移有密切的关系,而上皮细胞间质化作为肿瘤转移的一个早期事件可能会受到乳酸积累的影响,所以本研究就乳酸与TAZ促进肿瘤上皮细胞间质化进程的关系进行探讨,并深入阐释TAZ对肿瘤转移的影响。其中上皮细胞间质化的过程受几种关键转录因子的调节,研究结果指出转录因子Snail可以调节上皮细胞标志蛋白,在这一过程中起到关键作用。因此本研究进一步探讨了TAZ是否通过影响Snail的表达来调节上皮细胞间质化的发生。本文旨在深入探讨乳酸和上皮细胞间质化的联系及TAZ在其中的作用,从而进一步阐明肿瘤转移的分子机制,为肿瘤治疗提供新的靶点和策略。材料与方法选取人非小细胞肺腺癌细胞株H1299、A549作为研究对象。⑴用不同浓度的乳酸(5、10、15、20、30mM)刺激H1299、A549细胞,通过Western blot方法检测TAZ活性及Snail蛋白表达量的变化。⑵在H1299、A549细胞内转染TAZ si RNA,Western blot检测转染效率及Snail表达水平的变化。⑶在H1299、A549细胞内传染TAZ,siTAZ,TAZS89A,pcDNA,Snail Promoter以及海肾萤光素酶启动子CMV,应用Luciferase Assay Systerm技术检测细胞内Snail的表达水平。⑷在A549、H1299细胞内转染不同结构的TAZ,其中TAZD304,TAZDCC,TAZDWW表达TAZ功能缺失型蛋白,TAZ表达野生型蛋白,TAZS89A表达组成激活型蛋白,划痕后0h、24h、48h分别拍照,48h后应用Image Pro Plus图像处理软件测定划痕宽度并通过Western blot检测转染效率及转染前后Snail的变化。结果1、5,10,15,20,30mM乳酸处理后A549、H1299细胞TAZ活性升高、Snail表达上调,H1299细胞LKB1活性下降。2、转染siTAZ后,TAZ蛋白比空白组表达呈下降趋势,Snail蛋白表达变化与之相一致。3、用Promega公司的GLO MAX仪器检测Snail Promoter表达水平显示,siTAZ组与对照pcDNA组相比转录活性明显降低,TAZ,TAZS89A较对照组显著升高(H1299:p=0.006,0.001,0.000,A549:p=0.020,0.021,0.017)。4、转染3种功能缺失型,1种野生型,1种组成激活型TAZ后,划痕48h,发现只有转TAZDCC组与空载组相比划痕宽度没变化,其余组较空载组均有明显变窄。且Western blot结果显示,只有TAZDCC组Snail蛋白的表达量较空载组不存在差异。结论1、乳酸可以激活A549、H1299细胞中TAZ,Snail的表达,这种作用具有梯度效应。2、TAZ可以诱导Snail的表达。3、TAZ可以提高A549、H1299细胞的迁移能力,但CC结构域缺失后TAZ便不具有此功能了,并且缺失CC结构域的TAZ不能激活Snail的表达,说明CC结构域有可能行使了促进EMT进程的功能。