【摘 要】
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芳香胺类化合物2—乙酰氨基芴(2-acetylaminofluorene,2-AAF或AAF)是一种研究致突变剂和致癌物代谢活化的工具药,广泛运用于致突变致癌机制研究中。它作为间接遗传毒物可被细
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芳香胺类化合物2—乙酰氨基芴(2-acetylaminofluorene,2-AAF或AAF)是一种研究致突变剂和致癌物代谢活化的工具药,广泛运用于致突变致癌机制研究中。它作为间接遗传毒物可被细胞色素P450家族(特别是CYP1A1/1A2)N—羟化为N-OH-AAF,然后与鸟苷酸C8的亲核集团形成dG-C8-AAF、dG-C8-AF和dG-N2-AAF等DNA加合物,进而引起移码突变、错配等。除了与DNA形成加合物外,2-AAF还可诱导DNA单链断裂(single strand breaks,SSB)、双链断裂(double strands breaks,DSBs)、链内、链间交联等DNA损伤,其中DSBs是最严重的DNA损伤。 以往DSBs检测方法脉冲电场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)、彗星实验以及DNA洗脱实验,虽然可以量化DSBs,但检测效率比较低。近年来,γH2AX(gamma-H2AX,即磷酸化的H2AX)被认为可以灵敏、有效地检测DSBs。电离辐射(ionizing radiation,IR)诱导的DSBs导致组蛋白H2AX迅速发生磷酸化,大量磷酸化的H2AX募集其他DNA损伤修复蛋白到DSBs位点形成焦点复合物,并且γH2AX的数量和DSBs数量存在一一对应关系。另外,γH2AX焦点的形成与消失这一过程与DSBs的形成与修复密切相关。这些都提示γH2AX是一种灵敏检测DSBs的指示剂。在IR诱导的γH2AX形成的过程中,磷脂酰肌醇3—激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)样家族成员参与了H2AX的磷酸化。 本实验室曾用直接遗传毒物单功能烷化剂N-甲基-N-亚硝基胍(N-methyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG)处理FL和CHL细胞后,观察MNNG对γH2AX
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