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在高等植物中,光系统Ⅱ(PSⅡ)大量捕光天线(LHCⅡ)是类囊体膜上含量最多的色素蛋白复合体,它除了具有捕获能量与耗散能量的功能之外,还可以通过可逆的磷酸化过程平衡能量在两个光系统之间的分配,该过程受类囊体膜上电子传递链的氧化还原状态的调控。自然界中光质和光强的变化,都会导致两个光系统处于不同的激发态,引起类囊体膜上还原势的分布发生变化,造成能量分布的不平衡。前人的研究发现,当PSⅡ被过度激发时,在高等植物体内约有15-25%的LHCⅡ发生磷酸化。磷酸化的LHCⅡ(P-LHCⅡ)有一部分迁移到光系统Ⅰ(PSⅠ)上,相对增加PSⅠ的吸收,调节电子传递链还原势的分布,还有一部分与PSⅡ结合不发生迁移。关于磷酸化对LHCⅡ的结构和功能的影响,目前还缺少研究。 本文通过观察不同环境条件下豌豆体内LHCⅡ的磷酸化水平,研究了外界条件变化对LHCⅡ磷酸化水平的影响。在体内条件下,LHCⅡ总是保持一个磷酸化状态的平衡,LHCⅡ既无法完全去磷酸化又不能大量被磷酸化。本文又通过体外重组的方法得到完全没有磷酸化的reLHCⅡ,并用提取的含有STN7激酶的类囊体膜组分(粗激酶组分)对其进行体外磷酸化,通过蔗糖密度梯度离心和镍亲和层析柱分离纯化得到完全没有磷酸化的reLHCⅡ和大量磷酸化的reLHCⅡ(P-reLHCⅡ)三体。通过比较体内分离提取的LHCⅡ和P-LHCⅡ三体以及体外重租的reLHCⅡ和P-reLHCⅡ三体的光谱特性,研究磷酸化对LHCⅡ的结构、色素组成及蛋白间相互作用的影响。结果如下: 1.外界光质和光强的变化都能引起体内LHCⅡ发生磷酸化,促使机体为应对外界条件的急剧改变做好准备。 2.实验筛选了粗激酶组分的分离提取条件,以及reLHCⅡ体外磷酸化的条件,结果证明提取的粗激酶组分可以在体外大幅度提高reLHCⅡ的磷酸化水平。 3.在去垢剂环境中,体内分离提取的LHCⅡ和P-LHCⅡ三体以及体外重组的reLHCⅡ和P-reLHCⅡ三体的吸收、荧光及圆二色(CD)光谱均没有差异,说明磷酸化对LHCⅡ三体分子的构象、能级分布及分子内不同色素间的能量传递没有影响。 4.降低介质中的去垢剂浓度,LHCⅡ能够形成聚集体。77 K荧光发射光谱结果表明磷酸化削弱了reLHCⅡ形成聚集体的能力,推测磷酸化可能改变了LHCⅡ分子间的交互作用。