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目的:研究发现肺腺癌(lung adenocarcinoma)的发生发展过程中肿瘤细胞的迁移和侵袭能力均与上皮间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)密切相关。鼠双微体基因2(murine double minute 2,MDM2)参与了肺腺癌发生发展的病理进程,但其在肺腺癌细胞上皮间质转化过程中的功能和相关机制还尚不清楚。本研究着重探索MDM2基因在肺腺癌细胞上皮间质转化和迁移侵袭过程中的生物学功能和分子机制。方法:一:选取30例手术切除经病例明确为腺癌的人肺癌组织及癌旁组织采用定量RT-PCR、免疫印迹和免疫组织化学法分析MDM2,E-cadherin和N-cadherin基因表达水平;二:对PC9、H1975和A549三种肺腺癌细胞株和支气管上皮细胞采用定量RT-PCR和免疫印迹法分析MDM2,E-cadherin,Vimentin,β-catenin,Snail,Slug和N-cadherin基因表达水平;三:通过pcDNA3.0质粒和慢病毒稳定转染PC9、H1975细胞株构建MDM2基因过表达细胞株,采用慢病毒shRNA干扰系统构建MDM2基因沉默细胞株;采用MTT,Annexin V/PI双染色法,Transwell法与细胞划痕实验分别检测细胞增殖水平、细胞凋亡及迁移侵袭能力;四:免疫印迹法分析上述MDM2基因过表达细胞株及基因沉默细胞株中的Smad2和Smad3蛋白的表达及其磷酸化水平;siRNA介导的基因沉默法构建Smad2和Smad3基因沉默株系,测定其上皮间质转化特异性标志蛋白的变化;五:观察接种MDM2基因过表达及基因沉默的细胞裸鼠成瘤能力,及其MDM2基因及上皮间质转化相关基因的转录及蛋白表达水平。结果:人肺腺癌组织及PC9、H1975和A549三种肺腺癌细胞株中MDM2基因和间质细胞标志基因的表达显著高于对应的癌旁组织及支气管上皮细胞BEAS-2B,而上皮细胞标志基因的表达则明显降低。MDM2基因过表达的肺腺癌细胞增值速率显著增加,过表达细胞凋亡率显著低于对照(5.6±0.23%vs 7.7±0.19%,P<0.05),侵袭和迁移水平显著提高,上皮细胞标记蛋白E-cadherin和β-catenin表达水平显著下降,而间质细胞相关标记蛋白N-cadherin和Vimentin及相关转录调控因子Snail和Slug表达明显提高,且MDM2基因沉默肺腺癌细胞中的分析结果完全相反。此外,MDM2基因过表达提高了肺腺癌细胞中Smad2和Smad3蛋白表达和磷酸化水平,而MDM2基因沉默则显著抑制了Smad2和Smad3蛋白表达和磷酸化水平。Smad2和Smad3基因沉默抑制肺腺癌细胞上皮间质转化进程。42d时MDM2过表达组的裸鼠中肿瘤体积显著高于对照组(624.59±51.22mm3vs 543.11±54.81mm3,P<0.01),而MDM2基因沉默组体积则显著低于对照组(P<0.05),且瘤体重量也显著低于对照组(2.57±0.163g vs 3.47±0.14g,P<0.05)。结论:我们的研究发现肺腺癌细胞中MDM2高表达且与上皮间质转化相关标志基因表达具有高度相关性,MDM2基因可通过正向调控TGF-β/Smad信号途径来促进上皮间质转化,从而促进肺腺癌的发生发展。