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目的:维吾尔族饲鸽者肺免疫相关分子基因多态性、甲基化与细胞失衡机制的研究(MIP-1α基因单核苷酸多态性、HLA-DRB5基因甲基化及CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞与维吾尔族饲鸽者肺易感性的相关研究)方法:1)根据纳入及排除标准收集资料,总纳入92例,其中饲鸽者肺组32例、阴性对照组(饲鸽未患病组)30例及正常对照组(健康体检组)30例。对纳入者的全血标本进行DNA提取,根据UCSC数据库中SNP位点的序列信息,利用Mass ARRAY技术设计引物、完成样品制备、PCR扩增、SAP、单碱基延伸、点样质谱检测对MIP-1α基因各位点进行多态性分析;2)对纳入者的全血标本进行DNA提取、亚硫酸氢盐转化、PCR扩增、体外转录和RNase A特异性酶切,并行基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析技术检测HLA-DRB5基因甲基化情况;3)根据纳入标准收集PBL病例组32例,其中急性期15例、慢性期17例,阴性对照组30例。采集所有纳入者的血样标本,采用流式细胞仪检测受试者外周血的CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例和T淋巴细胞亚群。上述资料采用SPSS17.0软件进行基本情况统计分析,其他采用SAS软件进行统计分析,H-W检验不平衡者均采用趋势卡方检验。结果:1)与正常对照组相比,患病组与阴性对照组血清中MIP-1α浓度均有明显的增高(P<0.05);2)检测已报道的MIP-1α基因24个位点,其中rs1049191、rs1049195、rs3210166、rs1130374、rs5029407 rs1063340、rs190805628七个位点在维吾尔族饲鸽者中存在基因多态性(见质谱图);3)Hardy-Weinberg平衡检验:MIP-1α基因rs1049191、rs1049195、rs3210166、rs1130374、rs5029407位点的基因型分布经检验均不符合Hardy-Weinberg平衡定律(P<0.05),rs1063340位点基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05);4)饲鸽者肺组、阴性对照组及正常对照组三组基因型频率分布比较:rs1049191、rs1049195、rs3210166、rs1130374、rs5029407、rs190805628位点的基因型频率分布差异有统计学意义(P<0.05);rs1063340位点基因型分布频率比较差异无统计学意义(P>0.05);三组间各位点等位基因频率分布比较差异均无统计学意义(P>0.05);5)饲鸽者肺组与正常组(阴性对照组及正常对照组)两组之间基因型频率分布比较:rs1049191、rs1049195、rs3210166、rs1130374、rs5029407位点基因型分布频率差异有统计学意义(P<0.05);rs1063340及rs190805628位点基因型分布频率在两组间比较差异无统计学意义(P>0.05);6)连锁不平衡检验:本组SNPs位点经检验10组之间存在强的连锁不平衡:分别是rs1049191与rs1049195、rs1130374、rs3210166、rs5029407之间强LD;rs1049195与rs1130374、rs3210166、rs5029407之间强LD;rs1130374与rs3210166、rs5029407之间强LD;rs3210166与rs5029407之间强LD;C-C-G-G-C-C-C与T-A-G-A-C-G-T两种单体型可能与疾病发生相关;7)检测到HLA-DRB5片段的18个Cp G位点,Cp G1、Cp G2/3/4、Cp G5/6/7、Cp G8/9/10、Cp G11/12/13、Cp G14、Cp G16/17/18/19,各个位点在三组样本中的甲基化率比较差异不具有统计学意义(P>0.05);8)与对照组相比,急性期组、慢性期组外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例、CD4+CD25+Treg细胞比例明显降低,尤以急性期组降低显著(P<0.01);而急性期组和慢性期组比较,CD4+CD25+Treg细胞比例的差异无显著性(P>0.05);9)与对照组相比,急性期组和慢性期组外周血中CD4+T细胞%、CD4+/CD8+比值明显减少、CD8+T细胞%明显增加;三组结果比较差异有具有统计学意义(P<0.01);10)急性期组和慢性期组外周血中CD4+/CD8+比值与其外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例和CD4+CD25+Treg细胞的比例均呈正相关(r值分别为0.864和0.34,P<0.05)。结论:1)MIP-1α基因rs1049191、rs1049195、rs3210166、rs1130374、rs5029407、rs190805628、rs1063340位点在维吾尔人群中存在基因多态性;2)接触鸽子会引起MIP-1α浓度的增高,但尚未发现血清MIP-1α浓度增高与PBL发病存在相关性;3)MIP-1α基因单核苷酸多态性与维吾尔族饲鸽者肺遗传易感性相关。其作用机制可能是MIP-1α基因外显子及启动子区SNP影响MIP-1α基因的转录和表达,继而影响PBL疾病的发生;4)CC、GG基因型可能是维吾尔族PBL的易感因素,携带CC、GG基因型可能会增加维吾尔族饲养鸽子者患PBL的风险,这将从基因角度对于疾病的预防起到十分关键的作用;5)未发现HLA-DRB5基因甲基化与维吾尔族饲鸽者肺之间存在关联;6)维吾尔族饲鸽者肺患者体内CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的表达下调及过度消耗可能是饲鸽者肺发病机制中的重要因素,Treg细胞在维吾尔族饲鸽者肺发病的主要分子生物学机制可能是Th1/Th2机制失衡。通过流式法检测外周血Treg细胞比例及淋巴细胞亚群变化有助于协助诊断PBL疾病,目前国内外尚无此相关报道。