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目的:探讨大鼠脑额叶机械性损伤模型制作方法;比较GFAP、CHOP和Caspase-12在推断脑损伤形成时间中的价值。方法:根据脑定位图谱,利用脑定位仪定位脑前囟前4.6mm偏左2mm的M2区,用穿刺针穿刺,深度为2mm,制作额叶损伤模型,同时制作额叶对照组模型,即只在相应部位钻孔,不针刺。分别在伤后2h、6h、12h、24h、3d、7d和14d处死脑损伤模型大鼠。取出损伤处脑组织,放于10%中性甲醛固定24h,再将组织块脱水,浸蜡和包埋制成组织切片,经免疫组织化学染色技术对目标蛋白染色,观察GFAP、CHOP和Caspase-12在损伤区脑组织的表达,再利用计算机图像处理技术分析出各个时间段GFAP、CHOP和Caspase-12的IOD(平均光灰度)和AOD(平均光密度)值,并与损伤形成时间做相关性分析,根据三个指标的回归性分析判别三种指标在脑损伤形成时间推断中的价值以及时间相关性程度。结果:实验数据用spss软件进行统计图分析,IOD、AOD值柱状图与散点图显示:①GFAP指标组中,对照与2h、6h和12h组组IOD值比较P〉0.05;与24h、3d、7d和14d组比较P〈0.05;对照组与24h、3d、7d和14d组AOD值比较P〈0.05,而与2h组和12h组比较P〉0.05。GFAP的IOD和AOD值表达在2h-7d组表达持续增加,并在7d至10d之间达到高峰(见图10,图12),接近14d组开始下降,全程表达趋势近似一鈡形曲线。GFAP的IOD值在各个损伤时间表达的线性回归二次拟合中R2=0.956,回归方程Y=1.997X2+870.192X+58318.828,AOD值线性回归二次拟合中R2=893,回归方程Y=-7.595×10-6X2+0.03X+0.213。②CHOP指标组,对照组与2h-7d组IOD值比较P〈0.05;对照组与14d组IOD值比较P〉0.05;对照组与7d与14d组之间AOD值比较P〉0.05;对照组与2h、6h、12h和24h之间AOD值比较P〈0.05。CHOP蛋白IOD值2小时开始增高,6h左右达到高峰,12h表达略有下降,至24h组表达逐渐减少,3d后呈低表达状态。CHOP的IOD值在各个损伤时间段表达的线性回归分析相关程度R=0.529,回归方程为Y=-133.269x+44009.463,AOD值所显示的下降趋势与IOD表达类似,相关程度R=0.642,回归方程为Y=-0.122X+40.331。③Caspase-12指标组中,对照组与2h-7d组AOD值比较P〈0.05;对照组与14d组比较P〉0.05;对照组与7d组与14d组IOD值比较P〉0.05;对照组与2h、6h、12h、24h和3d组IOD值比较P〈0.05。Caspase-12在6H组开始增高,12h,24h组达到高峰,3d组至14d组,开始下降,直线回归不明显。结论:GFAP表达与损伤经过时间具有回归曲线关系,有较明显的峰值,为推断晚期脑损伤形成时间提供一定的途径与方法。CHOP蛋白在脑损伤2h开始增高,6h左右达到高峰,伤后7d接近对照水平,变化趋势快,在推断中早期脑损伤形成时间有一定价值。Caspase-12在脑损伤12h左右出现高峰值,为推断早期脑损伤形成时间提供一定的参考。