骨髓间质干细胞和脑源性神经营养因子联合修复兔脊髓外伤性截瘫的实验研究

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目的:(1)、观察兔自体骨髓间质干细胞(Bone marrow stromal cells BMSCs)静脉移植入脊髓外伤性截瘫(traumatic paraplegia)兔后在脊髓内的存活、迁徙、分化情况,以及脊髓结构和功能恢复的情况。(2)、探讨BMSCs和脑源性神经营养因子(Brain derived neurotrophic factor BDNF)联合应用对脊髓外伤性截瘫修复的影响。方法:抽取重量为2.0~2.5kg新西兰大白兔新鲜骨髓组织,体外分离培养BMSCs,培养至第四代后行流式细胞仪检测BMSCs表面标记物。运用改良Allen打击法制备兔脊髓外伤性截瘫模型,随机分为对照组、BMSCs组、BDNF组、BMSCs+BDNF组、假手术组。模型成功后分别于术后3天,对照组注射生理盐水(NS)1ml,BMSCs组行耳缘静脉移植DAPI标记的BMSCs1ml(2×106个/ml),BDNF组局部硬脊膜下置管连续注射BDNF(100ng/d),BMSCs+BDNF组为静脉移植DAPI标记BMSCs(2×106个)和局部硬脊膜下置管连续注射BDNF(100ng/d)。各组兔分别于移植后24h、1、3、5W应用改良Tarlov评分法、皮层体感诱发电位、HRP逆行示踪检测移植后神经功能恢复情况;应用免疫荧光组化技术检测BMSCs在脊髓内存活、迁徙及分化情况。结果:BMSCs体外培养表现为贴壁生长和多态性的特征,培养扩增至第五代,细胞数可达1-2×1011个。流式细胞仪检测第四代BMSCs示CD34、CD45阴性,CD29、CD90表达阳性。BMSCs组、BMSCs+BDNF组移植后1W标记的细胞在损伤区聚集并存活,且部分细胞表达神经元特异性标记物巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇酶
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