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本研究拟通过对PI3K/AKT/mTOR信号通路中关键信号分子蛋白在胃癌组织、癌旁组织(距肿瘤边缘5cm以上)、正常胃黏膜组织中的表达情况分析,在组织水平上分析PI3K/AKT/mTOR信号通路在胃癌中的发生、发展过程的作用及其调节机制,同时分析胃癌病人和正常人中SNP的变异情况,探讨mTOR基因多态性与胃癌发生的关系,为胃癌的靶向治疗提供科学依据。目的:1.比较PI3K/AKT/mTOR信号通路中关键信号分子PTEN、p-AKT、p-mTOR蛋白在胃癌组织、癌旁组织及正常胃黏膜组织中的表达水平差异,分析PTEN、p-AKT、p-mTOR三种蛋白在不同临床特征的胃癌病例之间表达水平是否存在差异,分析胃癌中的PTEN、p-AKT、p-mTOR三种蛋白阳性表达率之间是否存在相关性,进一步探讨PI3K/AKT/mTOR信号通路与胃癌的关系。2.以mTOR基因的两个SNP位点(rs3806317、rs1034528)为靶位点,以江苏南京地区胃癌患者为研究对象,比较胃癌病人和正常人中rs1034528、rs3806317两SNP位点的基因型和等位基因分布情况,同时分析不同临床特征的胃癌病人之间两SNP位点的基因型和等位基因分布情况是否存在差异,进一步探讨mTOR基因多态性与胃癌的关系。方法:1.采用免疫组织化学sp法(链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法),检测66例胃癌组织、66例癌旁组织、39例正常胃黏膜组织中PTEN、p-AKT、p-mTOR三种蛋白的表达水平,运用卡方检验来分析PTEN、p-AKT、p-mTOR蛋白在胃癌组织、癌旁组织及正常胃黏膜组织之间的表达阳性率分布情况是否存在统计学差异(α=0.05),同时比较PTEN、p-AKT、p-mTOR蛋白在不同临床特征的胃癌组织之间是否存在差异(α=0.05),并用Pearson相关分析进行PTEN、p-AKT、p-mTOR三种蛋白阳性表达之间的相关性分析。2.提取128例胃癌病人(病例组)和129例正常人(对照组)DNA,针对目的基因 mTOR 的两个 SNP 位点(rs3806317、rs1034528)进行 PCR 扩增,sanger 法对PCR样品进行测序,卡方检验分析胃癌病人和正常人中rs1034528、rs3806317两SNP位点的基因型和等位基因分布情况,比较胃癌病人不同临床特征与两SNP位点的基因型和等位基因分布情况是否存在相关性。运用X2分析各SNP位点的基因型相对于野生基因型的患病危险度及95%可信区间,以评估各基因型的风险。结果:1.PTEN蛋白在胃癌组织、癌旁组织和正常胃黏膜组织中的阳性表达率分别为53.03%(35/66)、84.85%(56/66)、74.36%(29/39)。PTEN 蛋白在胃癌组织、癌旁组织及正常胃黏膜组织中的表达阳性率差异具有统计学意义(P<0.05)。PTEN蛋白在癌旁组织中的表达水平要高于胃癌组织(P<0.0125),癌旁组织和正常胃黏膜组织之间的PTEN蛋白阳性表达率没有统计学差异(P>0.0125),胃癌组织与正常胃黏膜组织之间PTEN蛋白阳性表达率没有统计学差异(P>0.0125)。2.p-AKT蛋白在胃癌组织、癌旁组织和正常胃黏膜组织中的阳性表达率分别为56.06%(37/66)、16.67%(11/66)、2.56%(1/39)。p-AKT 蛋白在胃癌组织、癌旁组织及正常胃黏膜组织中的表达阳性率差异具有统计学意义(P<0.05)。同时p-AKT蛋白在胃癌组织中阳性表达水平高于癌旁组织、正常胃黏膜组织(P<0.0125)。3.p-mTOR蛋白在胃癌组织、癌旁组织、正常胃黏膜组织中的阳性表达率分别为90.91%(60/66)、71.21%(47/66)、5.13%(2/39)。p-mTOR 蛋白在胃癌组织、癌旁组织及正常胃黏膜组织中的表达阳性率差异具有统计学意义(P<0.05)。p-mTOR蛋白阳性表达水平在胃癌组织、癌旁组织、正常胃黏膜组织中呈现逐渐降低的趋势(P<0.05)。4.PTEN蛋白的表达水平与胃癌病例的年龄、性别、肿瘤直径大小、肿瘤分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移情况以及肿瘤的TNM分期临床病理资料之间未发现相关性(P>0.05)。5.p-AKT蛋白在浸润深度达到浆膜层的胃癌中阳性表达率要高于癌组织未浸润到浆膜层者(P<0.05);p-AKT蛋白在低分化胃癌中的阳性表达率要高于在中高分化胃癌(P<0.05);p-AKT蛋白在有淋巴结转移的胃癌中阳性表达率高于未出现淋巴结转移的胃癌(P<0.05);p-AKT蛋白在Ⅰ期、Ⅱ期胃癌中的阳性表达率要低于Ⅲ期、Ⅳ期胃癌(P<0.05)。未发现p-AKT蛋白与胃癌其他临床特征(年龄、性别、肿瘤直径)存在相关性(P>0.05)。6.p-mTOR蛋白在浸润深度达到浆膜层的胃癌中阳性表达率要高于癌组织未浸润到浆膜层者(P<0.05)。未发现p-mTOR蛋白与胃癌其他临床特征(年龄、性别、肿瘤直径、肿瘤分化程度、淋巴结转移情况以及肿瘤的TNM分期)之间存在相关性(P>0.05)。7.PTEN蛋白与p-AKT蛋白阳性表达率之间存在负相关且具有统计学意义(P<0.05);未发现p-AKT蛋白和PTEN蛋白与p-mTOR蛋白阳性表达率之间存在相关性(P>0.05)。8.mTOR的rs1034528位点的C、G等位基因频率在病例组中所占比例分别为18.85%、81.15%,在对照组中分别为16.67%、83.33%;CC、CG、GG三种基因型在病例组中所占比例分别为4.92%、27.87%、67.21%,在对照组所占比例分别为1.63%、30.08%、68.29%。mTOR的rs1034528位点的基因型以及等位基因频率在胃癌病人和正常人群中的分布没有统计学差异(P>0.05)。9.mTOR的rs3806317位点的C、T等位基因频率在病例组中所占比例分别为9.05%、90.95%,在对照组中分别为14.92%、85.08%。CC、CT、TT三种基因型在病例组中所占比例分别为0%、18.10%、81.90%,对照组所占比例分别为0.81%、28.23%、70.97%。携带C基因型(CC/CT)相比未携带C基因型(TT)在胃癌病人和正常人群中分布存在统计学差异(P<0.05),且携带C基因型(CC/CT)人患胃癌的风险是未携带C基因型(TT)人群的0.54倍(OR=0.54,95%CI为(0.293,0.996))。rs3806317位点等位基因频率在胃癌病人和正常人群中分布有统计学差异(P<0.05),C等位基因的人群患胃癌的风险是T等位基因人群的 0.568 倍(OR=0.568,95%CI(0.321,1.002))。10.rs3806317基因型的频率分布在不同年龄、性别、肿瘤直径、分化程度、浸润深度、TNM分期、有无远处转移的胃癌病人间未发现统计学差异(P>0.05),有淋巴结转移与无淋巴结转移的胃癌病人之间rs3806317基因型的频率分布具有统计学差异(P<0.05)。胃癌病人的rs1034528基因型频率的分布与临床特征(年龄、性别、肿瘤直径、分化程度、浸润深度、TNM分期、有无远处转移、有无淋巴结转移)均没有相关性(P>0.05)。结论:1.PTEN、p-AKT、p-mTOR三种蛋白在胃癌组织、癌旁组织及正常胃黏膜组织中的表达水平都存在不同程度的差异,胃癌组织中p-AKT、p-mTOR的高表达及PTEN的低表达证实了PI3K/AKT/mTOR信号通路在胃癌组织中处于过度激活的状态,p-AKT和p-mTOR的表达水平与胃癌病人临床特征密切相关,总体呈现恶性程度越高,p-AKT、p-mTOR表达水平越强的趋势。2.mTOR的rs3806317基因位点多态性可能与胃癌的发病之间存在一定的相关性,携带C基因型(CC/CT)可能是胃癌发病的一个保护因素。同时临床特征分析发现rs3806317(T>C)发生突变的频率与胃癌病人的淋巴转移情况存在一定的联系,未发现mTORrs1034528与胃癌之间的关系。