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5-羟色胺(5-HT)是神经系统的一种重要神经活性物质,具有多种生理功能,如调节运动、伤害性感受、摄食行为、体温以及焦虑和抑郁等。5-HT通过结合分布在中枢、周围神经系统和非神经组织(如内脏系统、心血管系统)中的一系列5-HT受体发挥作用。在过去的十多年里,利用分子克隆技术已成功发现了5-HT受体的7种类型14种亚型。除5-HT3受体亚型为配体门控离子通道型受体外,其余均为G蛋白耦联受体。在伤害性信息的传递和调控过程中,5-HT具有双重作用。一般认为,5-HT在中枢主要发挥镇痛作用,而在外周主要促进伤害性信息的传递。由于缺乏针对每种5-HT受体亚型的特异性抗体、激动剂和拮抗剂,对5-HT受体在脊髓和背根节(dorsal root ganglion,DRG)内的分布及其在伤害性信息传递和调控中的作用尚未完全阐明。 本研究采用反转录PCR(RT-PCR)法检测了大鼠脊髓背、腹角和DRG内5-羟色胺受体1亚型(5-HT1受体亚型)的分布,并观察了大鼠足底皮下注射蜜蜂毒(bee venom,BV)后脊髓和DRG内5-HT1受体亚型表达的变化。 第 四 军 医 大学硕 十学位论文一、5-HTI受体亚型IRNA在大鼠脊髓背、腹角内的分布及其在蜜蜂毒致痛后的表达变化 利用RTPCR法检狈0至fJ脊髓内存在5-HTIA、5-HT18、5-HTID和5-HTIF受体亚型的mRNA。采用Labworks软件对各阳性条带的密度进行分析,结果显示5爿、5-HTIB和5爿TID受体亚型的D叫A在胸髓、腰髓和骰髓背角的分布明显高于腹角,而在颈髓背角的分布仅略高于腹角。在脊髓内未检测到5-HTIE受体亚型的ERNA。5-HTIF受体亚型的hRNA在各个节段脊髓的背、腹角内均有较高水平的表达。 在大鼠足底皮下注射BV,所有大鼠均表现出自发痛和痛敏症状,较好地模拟了临床病理性痛的体征。行为学实验显示BV注入大鼠足底皮下可以引起持续约lh左右的自发痛和高峰大约在2~4h的长时程痛敏。本研究采用RTPCR法观察了足底皮下注射 BV后 lh和 4 h的大鼠脊髓腰段(L3工 6)内5羽TI受体亚型工RNA的表达变化。结果显示BV注射侧5爿T;。和5KT;。受体亚型BRNA的表达水平在 lh和4 h均明显升高。而对侧 5-HT;。和5-HT旧受体亚型mRNA的表达水平在 lh和 4 h均未升高。在 lh和 4 h均未发现双侧 5-HT,D和 5-HTIF受体亚型FRNA的表达水平发生变化。在BV致痛后,仍未检测到5-HTIE受体亚型的ERNA。二、5-HTI受体亚型IRNA在大鼠DRG内的分布及其在蜜蜂毒致痛后的表达变化 本研究采用RTPCR法观察到大鼠DRG内存在5-HTIA、5-HTIB、5-HTID和5-HT P受体亚型的mRNA。采用Labworks软件对各阳性条带的密度进行分析,结果显示5-HTIA和5-HTIB受体亚型iRNA的阳性条带密度较高,5丑 和5爿 受体亚型iRNA的阳性条带密度较低。未检测到5K 受体亚型的mRNA。 4 第四军医 大学硕士学位论文 BV致痛后 lh 干 4 h,BV注射侧大鼠腰段(L3-L6)DRG内 5-HTIA和5爿 受体亚型BRNA的表达水平均明显升高,而对侧 5-HTI。和 5-HTIB受体亚型mRNA的表达水平仅在4 h升高。5-HT;。和5-HT;,受体亚型mRNA的表达水平在 lh和4 h均无明显变化。BV刺激后,在大鼠DRG内仍未观察到5-HTIE受体亚型的iRNA。 大鼠脊髓内5-HT;受体亚型在背、腹角的分布差异提示它们对5爿T在中枢神经系统调控感觉和运动功能的过程中可能发挥不同的作用。蜜蜂毒致痛后大鼠腰段脊髓和 DRG内 5-HT;受体亚型 mRNA的表达发生不同程度的变化,提示这些受体亚型可能通过不同机制参与中枢和外周伤害性信息的传递和调控。