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目的近几年来,我国的恶性肿瘤爆发率呈逐年增高趋势,尤其是消化道恶性肿瘤中的胃癌,由于近年来国内食品质量安全问题,胃癌的发病率居高不下,同时胃癌的发病死亡率甚至达到了国内恶性肿瘤的前三位,胃癌严重威胁了群众健康。大多数胃癌诊断时已是中晚期,化疗成为重要的治疗手段。然而,目前尚未建立晚期胃癌标准化疗方案,靶向治疗近年来也收效甚微,亟需探索新途径和新方法。分子肿瘤学进展为胃癌分型和个体化精准治疗带来希望,基因干扰技术具有重要治疗应用前景。EGFR与胃癌发生发展关系密切,本课题组前期研究发现EGFR表达干扰可影响胃癌细胞的生物学行为和化疗药物敏感性,然而,其分子机制尚不清楚。本研究旨在通过慢病毒介导构建EGFR干扰的胃癌AGS细胞稳转株,CCK-8方法观察EGFR干扰对紫杉醇、奥沙利铂、氟尿嘧啶、顺铂以及多柔比星药物敏感性的影响,Western-blot方法检测EGFR干扰前后细胞中Akt、Bax、Bcl-2、BRCA1、Stathmin-1、Thymidylate Synthase和c-Myc的表达变化,并通过lncRNA芯片检测EGFR干扰对胃癌AGS细胞mRNA表达谱的影响,筛选差异表达基因,分析探讨其中可能的分子机制,为探讨EGFR干扰个体化用于胃癌的治疗提供实验和分子理论依据。方法以AGS细胞为研究对象,通过EGFR-siRNA干扰手段,构建EGFR低表达的胃癌稳转株;通过QPCR方法验证干扰效果;通过CCK-8方法观察其对紫杉醇、奥沙利铂、氟尿嘧啶、顺铂以及多柔比星等药物增殖抑制作用的影响;通过Western-blot方法检测Akt、Bax、Bcl-2,BRCA1、Stathmin-1、Thymidylate Synthase和c-Myc相对表达的变化,通过lncRNA芯片检测相关mRNA表达的变化。结果1.EGFR-siRNA转染AGS细胞后,经QPCR法检测后显示EGFR在AGS细胞中有干扰效果,其中EGFR-sh干扰下调66%。2.不同浓度的紫杉醇、奥沙利铂、氟尿嘧啶、顺铂和多柔比星分别处理两组细胞(AGS细胞组和EGFR-siRNA AGS细胞组)48h后,两组细胞的增殖抑制率均随浓度的增加而逐渐增加,且EGFR-siRNA AGS细胞组各浓度抑制率均比AGS细胞组相应浓度的抑制率高(P<0.05)。3.Western-blot结果显示EGFR-siRNA AGS细胞中AKT、Bcl-2、Stathmin-1、Thymidylate Synthase、c-Myc表达量较AGS细胞组低,而Bax、BRCA1的表达量较AGS细胞组高,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.lncRNA芯片检测结果显示,与AGS细胞相比,EGFR-siRNA AGS细胞中有242个基因表达上调,641个基因表达下调。其中表达上调的前10位基因分别为IFI27、FAM129C、TRABD2B、WT1、XRCC4、NECTIN4、JCAD、CARD11、ACTA2和GSDME,表达下调的前10位基因分别为PLXNA2、RALGPS1、SHROOM2、HKDC1、GLI2、CEACAM6、MYB、SIRPB1、KCNE3和NCF2。Pathway分析显示EGFR表达抑制的生物学作用可能与NF-κB信号通路有关。结论1.EGFR基因干扰能显著增加常见化疗药物对胃癌AGS细胞增殖抑制的作用,其机制可能是通过影响细胞增殖调控基因和药物敏感性相关基因的表达来实现的。2.EGFR基因干扰可导致胃癌AGS细胞mRNA表达谱改变,其生物学作用可能与NF-κB等信号通路有关。