对生物组织内部精细结构的分析是了解生物体生理功能的基础，主要方法是对组织样品进行三维重构。重构技术涉及的主要步骤有对组织样品的处理，切片，染色、成像、二维拼接和三维重构。目前使用的组织切片主要有石蜡切片，冰冻切片，半薄及超薄切片，临床上病理分析主要采用石蜡和冰冻切片，切片较厚，分辨率较低；半薄超薄切片主要用于电镜下组织细胞亚显微结构的观察，切片较薄，分辨率远高于石蜡和冰冻切片。对获得的图片进行二维拼接和三维重构可以获得组织内部精细空间结构，但是目前的方法均存在Z轴分辨率较低的缺陷。传统显微镜在X、Y轴上的分辨率为250nm，Z轴的分辨率是700nm，实际成像分辨率超过1μm。本文建立基于超薄切片方法的高分辨三维成像技术，可显著提高Z轴分辨率，用于组织精细结构的研究。对组织样品处理后，可将组织切成50nm-1000nm的连续半薄或超薄切片，具体切片的厚度即Z轴的分辨率。另外对切片进行染色，或者多重抗体标记，利用全自动显微镜对连续切片进行成像，对获得的图像进行二维拼接和三维重构，可以获得组织高分辨的三维空间信息。本文所建立的高分辨三维成像技术适用于各种组织内部精细结构研究，同时超薄切片方法为超高分辨显微成像技术提供Z轴的解决方案。