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章鱼胺是一种重要的生物胺,作为内源性的神经介质与β3-肾上腺素能受体激动剂,章鱼胺在能量的平衡与能量代谢的调节上有重要的作用,但其生物学意义与生理学作用尚未被充分认识。人体各种器官特别是肝脏中的细胞色素P450酶系单加氧酶是体内生物合成章鱼胺的限速酶,有关糖尿病、肝病对细胞色素P450酶系单加氧酶活性的影响已有详尽讨论。章鱼胺在人体内也可以因单胺氧化酶作用而被降解,而单胺氧化酶活性过强与抑郁症等精神疾患有关。因此,人血清章鱼胺含量有可能作为一项血液临床生化检验项目,在病理学和药理学的研究中有潜在的价值。
本论文分为两个部分,第一部分建立了人血清中肾上腺素能受体激动剂章鱼胺检测方法,为准确快速测定人血清中章鱼胺含量研究提供可靠的分析手段。第二部分是天然章鱼胺补充剂的开发,主要是水产品可食部章鱼胺含量的研究,以及通过营养性小鼠的减肥试验研究章鱼胺对小鼠的减肥降脂作用。
本论文目的之一是建立人血清中肾上腺素能受体激动剂章鱼胺检测方法,据大多文献介绍,章鱼胺的HPLC分析多为衍生化方法,但衍生化方法实验操作过程繁琐,且成本高。本试验想建立一种快速不需要衍生处理的HPLC检测方法,先将人血清用流动相稀释5倍,经微孔滤膜(0.45μm)滤过;在色谱条件的选择中,我们用色谱柱:phenomenex luna C18(150×4.60mm,5μm),流动相:0.02mol·L-l柠檬酸-0.02mol·L-1磷酸二氢钠(7∶3),pH调为3,流速:0.8mL·min-l,紫外检测波长:220nm,进样体积:20μL。实验结果表明,此方法章鱼胺在0.006~50μg·mL-1范围内,浓度与峰面积线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率为104.4%,RSD为1.53%。最低检出浓度为6.0ng·mL-1。此HPLC检测方法不需要衍生处理,样品用量少,可直接上机测定,具有良好的专一性,精密度和回收实验结果表明,测定结果稳定,具有微量、简便、快捷、灵敏等特点,能符合测定的要求。
为证明上述方法的可靠性,我们使用了HPLC柱前衍生方法与其进行比较,通过使用HPLC柱前衍生方法测定人血清中章鱼胺的含量。方法是先用高氯酸溶液提取,并用丹酰氯衍生;色谱条件的选择中,我们用ODS反相柱,柱温40℃,检测波长为254nm,用0.1mol/L醋酸铵和乙腈做流动相,梯度洗脱,流速为1.0ml/ml。章鱼胺标准品用流动相稀释成0.001~20mg/L的梯度溶液,按照色谱条件检测,以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标绘制标准曲线。经回归分析,章鱼胺在0.001~20mg/L范围内有良好的线性关系,相关系数大于0.999。最低检测限为6.0ng·mL-1。加低、中、高浓度标准品的回收率是90.0~110.0%。本实验方法灵敏、可靠,适合临床诊断以及药物研发中分析多种生物胺含量的研究。测出健康成年人血清章鱼胺的含量是成年人为4.87±1.70μg·mL-1。与之前不用衍生的方法测出的结果健康成年人血清章鱼胺含量为4.50±1.10μg·mL-1几乎吻合。
本论文目的之二是对天然章鱼胺的开发,首先是对水产品可食部章鱼胺含量的研究,我们测定了各种淡水和海水水产品可食部中β3-肾上腺素能受体激动剂章鱼胺的含量,为水产品中章鱼胺的开发利用提供依据。取鱼、甲壳类、头足类可食部位匀浆后超声处理,用HPLC测定离心后上清液的章鱼胺含量。结果表明8种淡水鱼肉章鱼胺含量在30~130μg·g-1之间,其中,背肉普遍比腹肉中含量高。海水鱼以及淡水甲壳类的章鱼胺含量与淡水鱼大致相似。海水甲壳类中章鱼胺含量特别高,是淡水、海水鱼和淡水甲壳类的几十倍,甚至千百倍。头足类的章鱼胺含量也比较高,在海洋藻类中未检测出章鱼胺。海洋贝类等是水产品中章鱼胺最丰富的来源,是减肥者与糖尿病人的理想食物。
其次我们研究了章鱼胺对营养性肥胖小鼠的减肥作用。首先采用高脂饲料建立小鼠肥胖模型,以小鼠体重、Lees指数、脂肪湿重、脂肪系数、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及高密度脂蛋白(HDL-C)等指标的变化,研究章鱼胺对小鼠的减肥作用。4周以后,肥胖对照组小鼠较普通对照组小鼠体重、脂肪湿重、脂肪系数、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及高密度脂蛋白(HDL-C)含量均显著增加(P<0.05),表明营养肥胖模型构建成功。建模成功后,对章鱼胺高、中、低3个剂量组分别以60、30、15mg/kg-d剂量的章鱼胺灌胃,阳性药对照组给予8mg/kg·d的祛脂瘦身胶囊,模型对照组及正常对照组给以等体积溶媒。灌胃4周后,本试验发现,章鱼胺各剂量组及阳性对照组中小鼠体重、脂肪湿重、脂肪系数、血清总胆固醇(TC)与模型组存在显著性差异(P<0.05),其中Lees指数和甘油三酯(TG)的中、高剂量组与模型组存在显著性差异(P<0.05)。结论:章鱼胺对营养性肥胖小鼠有一定的减肥降脂作用。