论文部分内容阅读
研究背景:急性髓系白血病（Acute myelogenous leukemia,AML）是一种以髓系原始幼稚细胞恶性克隆性增殖为特征的血液系统疾病,具有高度的肿瘤异质性和极强的侵袭力,能够使机体的正常造血功能受到干扰和抑制。迄今为止,许多研究表明基因改变和表观遗传调控参与了AML的发生和发展。尽管近年来在AML的准确诊断以及合理治疗方面有了逐步的进展,患者可以接受传统化疗、靶向治疗和异基因干细胞移植（allo-HSCT）等治疗,但是许多患者仍遭受着完全缓解后复发或难治的困扰,总体的生存期较短,预后不佳。而白血病干细胞（Leukemia stem cells,LSCs）被认为对化疗药物具有抵抗性,是白血病复发难治的主要原因。因此,寻找AML的潜在治疗靶点,找到干扰AML相关基因和表观遗传学改变的新方法,以求改善AML患者的预后和生存条件,是一个非常值得研究的领域。相比于正常的造血干细胞（Hematopoietic stem cells,HSCs）,LSCs显示出特定的突变特征、代谢特征以及表观遗传学修饰特征。LSCs保持了HSCs的许多性能,包括多分化能力、自我修复能力以及强大的生长增殖能力,并且和正常造血干细胞拥有一些相同的表面标记:CD34+CD38-、HLA-DR、CD71-。目前许多研究致力于识别LSCs上特异性的膜生物标志物,用来精确无误的识别LSCs,并将LSCs与HSCs区分开来。其中最有意义的标记物之一就是CD123/IL-3Rα（Interleukin-3alpha receptor）。CD123,是IL-3受体的α亚基,一种1型跨膜糖蛋白,是细胞因子受体超家族中的成员之一。CD123是一种具有高度特异性的免疫表型,在白血病干细胞中高表达而在造血干细胞上基本不表达。目前为止,CD123已被证明在多种血液系统恶性肿瘤中表达量增加。已有的文献报道,伴有CD123高表达的AML患者,其临床治疗缓解率较不表达CD123的AML患者降低,且复发率增高、治疗反应不佳、无病生存期缩短,提示CD123与AML患者预后不良相关。长链非编码RNA（Long non-coding RNA,lnc RNA）是一种比其他类型的调控性RNA更长的核苷酸分子,长度大于200bp,缺乏编码蛋白质的指令。lnc RNA调控基因表达的方式有多种,可以通过转录前、转录和转录后等途径对生命活动进行调控。随着高通量测序技术和芯片技术的广泛应用,关于lnc RNA的研究也逐渐成为了科学研究的一个热门领域,目前人们已经在多种恶性肿瘤组织中找到了数量丰富的lnc RNA。它们在恶性肿瘤疾病的发生与进展中发挥着关键作用,或是促进癌症的基因,或是抑制癌症的基因,这也使得lnc RNA为临床难治性癌症的发现、防治、评估病情进展以及判断预后提供了一定的研究依据。通过已有的研究报道,CD123可能在AML的发生发展中发挥了重要作用,并被认为与AML患者的不良预后有关。目前,与CD123相关的长链非编码RNA在AML发生、发展及预后方面的作用的相关报道并不多见。本课题组前期应用高通量测序技术筛选出了CD123-和CD123+初治AML患者骨髓样本中差异表达的非编码RNA。本实验将应用实时荧光定量PCR（q RT-PCR）验证在AML中与CD123相关的长链非编码RNA是否存在表达量上的差异,有差异表达的CD123相关长链非编码RNA有可能在AML的启动和发展中发挥作用,对患者的生存和预后产生影响,为深入了解AML的发病机制以及AML靶向治疗提供一定的理论依据。目的:1.分析CD123的表达与初治AML患者临床特征及疗效的相关性。2.通过实时荧光定量PCR（q RT-PCR）验证CD123/IL-3Rα相关长链非编码RNA在初发AML CD123-和CD123+患者中的差异表达。方法:1.在前期课题组通过高通量测序筛选出的CD123-和CD123+初治AML患者骨髓样本差异表达的nc RNA中确定需要验证的目标lnc RNA;2.收集初治AML患者的临床骨髓标本,CD123-组和CD123+组的初治AML患者分别为10例和8例;3.收集初治AML患者的临床及实验室资料,包括年龄、性别、初诊时白细胞计数、血红蛋白浓度、血小板计数、骨髓白血病细胞比例、染色体核型、基因突变等,并观察首次化疗及2疗程化疗后的疗效。4.用实时荧光定量PCR对AML患者骨髓样本进行目标lnc RNA的验证;使用SPSS 26.0和Graph Pad Prism 9.0统计软件进行数据分析和图形处理。根据数据分布的类型,如果数据符合正态分布用均数±标准差进行统计描述,采用非配对t检验对组间差异进行统计分析;如果数据不符合正态分布用中位数（四分位数间距）进行统计描述,采用曼-惠特尼U检验（Mann-Whitney U检验）进行统计分析。两分类变量采用Fisher确切概率法进行比较。双侧P＜0.05时表示两组之间的差异具有统计学意义。结果:1.CD123+AML患者初诊时骨髓白血病细胞比例高于CD123-AML患者。2.与CD123-组相比,JHDM1D-AS1、FBXL19-AS1在CD123+组中表达量增加。3.与CD123-组相比,BOLA3-AS1、HSPC324、LINC01355、FAM13A-AS1、LOC339803、MAGI2-AS3、BAALC-AS2、LINC00877在CD123+组中的差异表达无统计学意义。结论:1.与CD123-组相比,CD123+组患者初诊时具有更高的骨髓白血病细胞比例。2.经实时荧光定量PCR（q RT-PCR）验证发现在初治CD123-AML患者和CD123+AML患者骨髓中差异表达的lnc RNA有JHDM1D-AS1、FBXL19-AS1。与CD123-组相比,JHDM1D-AS1、FBXL19-AS1在CD123+组中表达量增加。