骨髓间充质干细胞移植联合高压氧治疗兔脊髓冲击伤

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目的建立兔脊髓冲击伤模型,利用兔骨髓间充质干细胞联合高压氧治疗兔脊髓冲击伤,评价其联合治疗效果是否优于其两种治疗方法单独应用的效果。方法在气压源为600kPa的压力下应用霍普金森杆产生冲击波建立T9-T10段脊髓损伤的脊髓冲击伤大白兔模型,通过运动学Reuter、改良Tarlov评分和体感诱发电位选择脊髓损伤程度相同的48只体重2.2~2.5 kg清洁级健康新西兰大白兔48只,随机分为A组、B组、C组和D组,每组12只。12h后对各组分别作空白对照、高压氧治疗(20 min加压至200 kPa,稳压30 min,氧浓度维持在(86±2)%,20 min缓慢减压至正常,共70 min。每天上、下午各1次,疗程为20d)、骨髓间充质干细胞移植(约10~5/ml的骨髓间充质干细胞悬液采取直视下在T10椎体段稍下处用脊髓穿刺法缓缓注入0.5 ml骨髓间充质干细胞悬液入蛛网膜下腔)、两者联合治疗方面的干预。6周后行运动感觉功能评分(Reuter、改良Tarlov评分)、荧光细胞免疫荧光示踪、脊髓组织甲苯胺蓝染色、脊髓组织凋亡免疫组化染色(Bax、Bcl-2检测凋亡)等检测,采用SPSS 13.0软件,运动学评分及荧光细胞数组间比较采用单因素方差分析,免疫组化的阳性率采用χ2检验,P <0.05认为有统计学差异。结果高压氧治疗组和骨髓间充质干细胞移植组的运动学评分及病理学指标均优于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05),两者联合治疗组的相关指标较其他治疗组效果明显,差异有统计学意义(P<0.05)。1.应用体感诱发电位评价各组治疗前后潜伏期及波幅差,治疗后,D组恢复情况优于其它三组,单独细胞移植组次之,高压氧组再次,空白组最不明显。各组间具有统计学意义(P<0.05)。2.术后6周各组用Reuter和改良Tarlov评分法比较,其中D组效果优于其它三组,单独细胞移植组次之,高压氧组再次,空白组最不明显。差异有统计学意义(P<0.05)。3.通过免疫荧光观测D组荧光细胞数明显多于C组,行手工计每组每张切片荧光细胞的总数, D组荧光细胞明显多于C组,差异有统计学意义(P<0.05)。4.应用甲苯暗蓝染色,见A组神经细胞胞质肿胀、脱髓鞘化,凋亡明显;B组经高压氧治疗,凋亡情况较A组减少,但仍然明显;C组可见少量神经细胞再生,凋亡亦较少;D组神经细胞完整,脊髓灰白质形态完好,神经细胞完整,未见明显的细胞胞质肿胀、脱髓鞘化等凋亡表现。损伤阶段有较多的神经细胞再生。比较各组神经细胞凋亡,差异有统计学意义(P<0.05)。5.取脊髓T10段脊髓行免疫组化Bcl-2、Bax检测凋亡,A~D组神经细胞凋亡率较正常脊髓组织高,其中D组细胞凋亡表达率较其它组显著减少,差别有统计学意义(P<0.05)。6.治疗6周后,通过TUNEL法检测细胞凋亡评价不同治疗组,神经凋亡细胞数目多少不同, A组TUNEL阳性细胞表达强烈,可见棕褐色颗粒和块状物。B组凋亡细胞较A组减少,C组再较B组减少,联合治疗的D组凋亡细胞最少,少见阳性细胞表达,各组数据差别有统计学意义(P<0.05)。结论单独应用干细胞移植和高压氧均能对脊髓冲击伤产生一定的修复作用,高压氧可能存在一定的机制,促进骨髓间充质干细胞移植治疗兔脊髓冲击伤的效果,因而两种治疗措施联合能发挥协同作用,增强治疗效果。
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