【摘 要】
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目的观察益骨汤对骨质疏松大鼠经典Wnt信号通路上Wnt1Ob、β-catenin、DKK1（Di ckkopf1）、Runx2（Runt related transcription factor 2）、OSX（Osterix）和 BMP-2（bone morphogenetic protein-2）信号通路上 BMP-2、Smads、Noggin、Runx2、OSX 等相关基因转录及蛋白表达的影响
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目的观察益骨汤对骨质疏松大鼠经典Wnt信号通路上Wnt1Ob、β-catenin、DKK1（Di ckkopf1）、Runx2（Runt related transcription factor 2）、OSX（Osterix）和 BMP-2（bone morphogenetic protein-2）信号通路上 BMP-2、Smads、Noggin、Runx2、OSX 等相关基因转录及蛋白表达的影响,探究益骨汤防治骨质疏松症（osteoporosis,OP）的作用机制。方法将40只雌性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、补佳乐治疗组、益骨汤治疗组,共4组,每组各10只;模型组、补佳乐治疗组、益骨汤治疗组大鼠行双侧卵巢切除术建立骨质疏松症模型。常规饲料喂养3个月造模成功,益骨汤治疗组大鼠予以10mL/kg益骨汤水提液灌胃,补佳乐治疗组予以0.36mg/kg补佳乐水溶液灌胃,空白组和模型组予以10mL/kg蒸馏水灌胃。3个月后观察各组大鼠骨密度、骨组织病理学,同时采用R T-PCR和蛋白质印迹法以及免疫组化等方法检测Wnt10b、β-catenin、DKK1、BMP-2、Smads、Noggin、Runx2、OSX等相关基因、蛋白表达变化。结果（1）骨密度测定结果:模型组大鼠骨密度明显低于空白组（p＜0.05）;益骨汤组大鼠骨密度明显高于模型组（p＜0.05）。（2）HE染色:去势大鼠骨小梁变细变薄,髓腔扩大,数目减少。益骨汤组大鼠经过益骨汤的治疗,使骨小梁受到保护,减轻了骨小梁的破坏,骨小梁略偏细,形态尚规则,排列尚整齐。（3）RT-PCR:经典Wnt通路结果显示,去势大鼠体内Wnt10b、β-catenin、Runx2、OSX mRNA表达与空白组相比受到抑制,显著降低（p＜0.05）,DKK1被激活,表达增高（p＜0.05）;而益骨汤组Wnt 10b、β-catenin、Runx2、OSX mRNA表达与模型组相比明显增高（p＜0.05）,DKK1表达明显降低,差异有统计学意义（p＜0.05）。BMP-2通路结果显示,与空白组相比,去势大鼠体内BMP-2、Smads、Runx2、OSX mRNA表达明显下降（p＜0.05）,Noggi n表达增高（p＜0.05）;益骨汤组BMP-2、Smads、Runx2、OSX mRNA表达比模型组明显增高（p＜0.05）,Noggin表达降低,差异有统计学意义（p＜0.05）。（4）Western-Blot 与免疫组化结果:去势大鼠体内 Wnt10b、β-catenin、BMP-2、Smads、Runx2、OS X蛋白表达受到抑制,为低表达,益骨汤能够增强去势大鼠上述蛋白的表达。结论（1）益骨汤具有明显防治去势大鼠骨质疏松症的作用;（2）激活经典Wnt与B MP-2双信号通路,同时抑制DKK1与Noggin可能是其防治骨质疏松症的作用机制。
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