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目的： 观察转染鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase-1,SPHK1)活性的脐带间充质干细胞(mesenchymal stem cells derived from human umbilical cord，UCMSC)和UCMSC对多发性硬化的实验动物模型：实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)小鼠治疗效果的研究，并探讨其可能的机制。 方法： 采用组织块法分离培养UCMSC，运用流式细胞仪检测多种分子表面标志，以确定分离培养出来的细胞符合 UCMSC细胞免疫表型，同时对 UCMSC进行相关质控工作。携带SPHK1基因的腺病毒载体，滴度为1.25×1011/ml。第三代UCMSC复苏在细胞培养皿中，培养基为含10％胎牛血清的DMEM培养基(dulbecco”s minimum essential medium,DMEM)。当细胞长满细胞培养皿3/4时，更换血清浓度为5%的DMEM培养基，按照腺病毒滴度，每个细胞培养皿加入16ul携带有SPHK1基因的腺病毒。腺病毒刺激UCMSC48小时后收集UCMSC，然后提取蛋白。之后用westernblot实验方法检测UCMSC中SPHK1的表达，并和未转染病毒的UCMSC、转染未携带SPHK1基因病毒的UCMSC比较。采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG35-55）作为抗原与完全弗氏佐剂免疫 C57BL/6小鼠制作 EAE模型，UCMSC-SPHK1组小鼠分别在免疫后第7、14、21、28d通过尾静脉注射转染SPHK1活性的UCMSC（5.5×106/只，0.2 ml），UCMSC组小鼠尾静脉注射 UCMSC（5.5×106/只，0.2 ml），对照组和EAE组注射同等体积的生理盐水。采用临床评分和脊髓病理切片评估各组小鼠发病情况。免疫组化方法检测各组小鼠脊髓星形胶质细胞酸性蛋白（GFAP）、髓鞘碱性蛋白（MBP）的表达。流式细胞术检测小鼠脾脏淋巴细胞NK细胞、调节性T细胞CD4＋CD25＋的表达变化。ELISA检测小鼠外周血细胞因子干扰素γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素17（IL-17）和白介素4（IL-4）的含量。 结果： 采用组织块法可方便经济的从脐带中成功分离出间充质干细胞，流式细胞仪检测细胞表达间充质干细胞分子表面标志的CD44，CD29和CD105，并不表达人白细胞抗原-DR、内皮细胞标志的CD31和造血细胞表面抗原的CD45；分离培养的UCMSC没有细菌、真菌、乙肝病毒、HIV病毒和内毒素的污染，可用于接下来的实验。经 westernblot分析，转染 SPHK1基因的UCMSC明显高表达 SPHK1蛋白，而未转染病毒的UCMSC、转染未携带SPHK1基因病毒的UCMSC，SPHK1蛋白表达量明显较低。髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG35-55）与完全弗氏佐剂免疫C57BL/6小鼠成功制作 EAE模型，14天左右小鼠陆续出现神经功能缺失症状。经尾静脉注射干细胞治疗后，UCMSC-SPHK1组小鼠症状明显较 UCMSC组小鼠和EAE组小鼠轻，临床评分明显减低。UCMSC-SPHK1组小鼠脊髓 HE染色，炎性细胞较UCMSC组小鼠和EAE组小鼠明显减少，脊髓Fast-blue染色显示，髓鞘脱失较另外两组明显减少。各组小鼠脊髓免疫组化对比表明，在GFAP的表达上，UCMSC-SPHK1组小鼠明显少于UCMSC组和EAE组。在MBP表达上，UCMSC-SPHK1组小鼠髓鞘脱失较少，MBP表达量明显多于UCMSC组和EAE组。流式细胞术检测显示，UCMSC-SPHK1组小鼠脾脏淋巴细胞中，NK细胞较UCMSC组和EAE组明显减少，而调节性 T细胞 CD4＋CD25＋的表达较上述两组明显增多。外周血 ELISA检测显示，UCMSC-SPHK1组小鼠外周血中细胞因子 IFN-γ、TNF-α和IL-17表达量较UCMSC组和EAE组减少，而IL-4的表达量较上述两组升高。所有的实验数据都使用SPSS10.0统计软件统计分析，两组间比较采用T检验的方法，多个样本均数之间比较采用单因素方差分析的方法。 结论： 转染SPHK1基因的UCMSC明显高表达SPHK1蛋白,具有SPK活性；MOG35-55与完全弗氏佐剂免疫 C57BL/6小鼠成功制作 EAE模型；经尾静脉注射转染 SPHK1基因的UCMSC后，小鼠症状明显减轻，脊髓炎性细胞明显减少，髓鞘脱失也明显减少，脊髓GFAP表达减少，MBP损失较少。经尾静脉注射转染SPHK1基因的UCMSC后，小鼠脾脏中杀伤性细胞减少，而调节性T细胞增多；外周血ELISA表明，Th1型细胞因子减少，Th2型细胞因子增多。经尾静脉注射转染SPHK1基因的UCMSC后，小鼠免疫调节功能明显增强，因此，结果提示具有SPK活性的UCMSC可能成为治疗MS的一种新型生物方法。