目的:(1)研究天麻素在长春新碱抗肿瘤中所发挥的免疫功能调节作用。(2)大鼠移植瘤肿瘤模型成功建立的基础上,研究天麻素对长春新碱致大鼠神经病理性疼痛的保护作用。方法:实验动物为合格SD大鼠50只,根据大鼠痛阈值高低通过随机区组的方法分成5组:对照组(control)、肿瘤模型组(model)、长春新碱组(VCR)、VCR+天麻素低剂量组(VCR+Gas(60mg/kg))、VCR+天麻素高剂量组(VCR+Gas(120mg/kg))。对照组沿腋窝皮下深筋膜处注射0.2ml DMSO,其余各组注射0.2ml(5*10~6个)乳腺癌细胞。VCR组及VCR+天麻素低、高剂量组于第7天隔日腹腔注射VCR(125μg/kg)。此外,VCR+天麻素低、高剂量组于第14天腹腔注射天麻素。(1)第一部分:基于免疫调节功能探讨天麻素对长春新碱抗肿瘤的增强效应。对各组大鼠瘤重进行测定,HE染色观察肿瘤组织形态学的变化;测定大鼠脾脏及胸腺指数来观察免疫功能情况;采用流式细胞术测定大鼠脾脏T淋巴细胞亚群CD4~+及CD8~+的占比;ELISA法检测大鼠血清中Th1/Th2型细胞因子IL-12、IFN-γ、IL-4、IL-10的表达水平。(2)第二部分:基于Notch信号通路调控小胶质细胞CX3CR1活化通路探讨天麻素对长春新碱致大鼠神经毒性的保护作用。测痛仪测定大鼠机械、热及冷痛阈值;Western Blot检测脊髓Notch1、Jagged1、NICD、Iba-1、CX3CL1、CX3CR1、P-p38蛋白的表达水平;q RT-PCR法检测Hes1 m RNA(Notch信号通路下游靶基因)的表达水平;ELISA法检测炎性因子TNF-α、IL-1β的表达。结果第一部分:(1)与正常组相比,肿瘤模型组可看到大量肿瘤细胞,异型性明显,呈浸润性生长。给予抗肿瘤化疗药VCR后瘤重下降,肿瘤细胞出现核固缩核溶解现象(P<0.05)。联合使用天麻素后,其抑瘤率更高,肿瘤细胞无完整结构,核固缩核溶解现象更明显,且呈剂量依赖性(P<0.01 or P<0.05)。(2)与对照组比较,肿瘤模型组大鼠脾脏、胸腺指数明显降低(P<0.01);与肿瘤模型组相比,VCR组大鼠指数有轻微上升或不变趋势;联合使用天麻素后大鼠指数显著升高(P<0.01),呈剂量依赖性。(3)与对照组相比,肿瘤模型组大鼠CD4~+T细胞比例及CD4~+/CD8~+比值显著降低,CD8~+T显著升高(P<0.01)。对肿瘤模型组相比,VCR组大鼠免疫功能有一定好转(P>0.05);VCR+天麻素组大鼠CD4~+T细胞比例及CD4~+/CD8~+比值显著升高,CD8~+T显著降低,且呈剂量依赖性(P<0.01)。(4)与对照组比较,肿瘤模型组大鼠IL-12、IFN-γ的表达显著降低,IL-4、IL-10的表达则升高(P<0.01)。与肿瘤模型组比较,VCR组大鼠有一定正向作用,但不明显;VCR+天麻素组大鼠IL-12、IFN-γ的表达明显升高,IL-4、IL-10的表达显著降低,且呈剂量依赖性(P<0.05 or P<0.01)。第二部分:(1)给药前各组大鼠行为学痛阈值差异均无统计学意义(P>0.05)。接种乳腺癌细胞后,各组大鼠痛阈值较正常组并无明显差别(P>0.05)。与肿瘤模型组相比,VCR组大鼠机械痛、热痛及冷痛痛阈值均显著降低(P<0.01);而天麻素抑制了VCR诱导的痛觉过敏或超敏反应(P<0.01)。(2)与对照组相比,肿瘤模型组大鼠脊髓中Notch 1、Jagged 1、NICD蛋白、Hes1 m RNA的表达有所上调(P<0.01或P<0.05);与肿瘤模型组相比,VCR组大鼠脊髓中Notch 1、Jagged 1、NICD蛋白、Hes1 m RNA的表达均明显上调(P<0.01);而天麻素抑制了主要由VCR引起的Notch 1、Jagged 1、NICD、Hes1 m RNA高表达,且呈剂量依赖性(P<0.01)。(3)与对照组相比,VCR组大鼠脊髓中Iba-1、CX3CL1、CX3CR1、P-p38的表达量均上调(P<0.01);而天麻素抑制了主要由VCR引起的Iba-1、CX3CL1、CX3CR1、P-p38蛋白表达增高,且呈剂量依赖性(P<0.01)。(4)与对照组相比,VCR组大鼠脊髓中炎性因子TNF-α、IL-1β的表达量均明显上调(P<0.01)。而天麻素抑制了主要由VCR引起的TNF-α、IL-1β的高表达,且呈剂量依赖性(P<0.01 or P<0.05)。结论:(1)天麻素可能通过调节大鼠机体免疫功能,恢复Th1/Th2免疫平衡增强抗肿瘤免疫,从而对VCR抗肿瘤产生增强效应。(2)天麻素可能通过抑制Notch信号通路的活化,继而抑制小胶质细胞CX3CR1活化通路,减少炎性因子TNF-α、IL-1β,从而缓解化疗药长春新碱诱导的神经病理性疼痛。