第二近红外窗口荧光量子点细胞膜修饰及外泌体标记

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第二近红外窗口(1000-1700 nm,NIR Ⅱ)荧光活体成像具有信背比高、时间-空间分辨率高等优点,在肿瘤成像和体内示踪等领域受到广泛关注。因此,高质量荧光探针的构建显得极为重要,其中,标记材料的制备及表面功能化策略是关键。在众多的NIR Ⅱ荧光材料中,量子点具有发射波长可调、耐光漂、吸收光谱宽、发射光谱窄、易表面功能化等优点,是一种理想的标记材料。迄今为止,如何将NIR Ⅱ量子点转变成荧光强度高、血液循环时间长、靶向性和生物相容性良好的荧光探针仍然是一种挑战,其主要原因是表面功能化策略的不足。多年来,本课题组致力于NIR Ⅱ荧光量子点的制备,合成了高性能的银系和铅系量子点。本论文针对量子点在肿瘤部位富集效率低,成像信背比不足的问题,采用肿瘤细胞膜修饰,有效改善了探针的血液循环时间和靶向性,增强了肿瘤活体成像效果。同时,为满足外泌体体内示踪的研究需求,采用两种波长的PbS量子点分别标记不同功能的外泌体,建立了外泌体NIR Ⅱ双色荧光标记方法。论文的具体研究内容如下:(1)将发射波长为1300 nm的Ag2Te量子点和聚(乳酸-羟基乙酸)(PLGA)自组装形成NIR Ⅱ荧光纳米球,然后将小鼠乳腺癌细胞膜包覆在纳米球表面,制备得到NIR Ⅱ荧光纳米生物探针。由于PLGA纳米球的疏水空腔对包覆在其内部的Ag2Te量子点的荧光起到了汇聚和保护作用,使单颗纳米球的荧光强度是单颗Ag2Te量子点的63倍,且具有非常优异的荧光稳定性,在激光连续照射1h后仍保持荧光强度不变。同时,表面的细胞膜赋予了探针躲避免疫系统清除和靶向同源肿瘤的功能。该探针通过主动靶向和肿瘤高通透性和滞留效应的共同作用,在肿瘤部位的富集效率高达(31±2)%ID/g(%注射量/组织质量),有效提升了体内肿瘤成像信背比(13.3±0.7)。该工作结合量子点荧光波长可调、强度高、耐光漂等优点和肿瘤细胞具有免疫逃逸和同源靶向的特点,制备了一种新型NIR Ⅱ荧光纳米生物探针,有效增强了体内肿瘤成像效果。(2)基于PbS量子点在NIR Ⅱ窗口发射波长易调控、荧光强度高的特点,建立了NIR Ⅱ双色荧光高效标记外泌体的方法,实现了不同功能外泌体的体内示踪研究。首先,可控制备了发射波长为1100 nm和1550 nm高质量的PbS荧光量子点,并在量子点表面偶联了链霉亲和素,为标记外泌体打下基础。其次,利用磷脂交换策略得到了生物素化的外泌体,通过生物素-亲和素的特异性作用,实现了量子点对外泌体的高效、无损标记。最后,用1100 nm和1550 nm的PbS量子点分别标记表面不表达和高表达PD-L1的外泌体,并通过NIR Ⅱ荧光成像研究了两种外泌体在模型小鼠体内的代谢及分布情况,为研究外泌体如何参与机体免疫调节作用提供了新的手段。
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