陈化烟叶微生物的分离鉴定及其在烟叶发酵中的应用

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本研究为筛选得到烟叶增香微生物,探索微生物对烟叶的增香机理。通过采集同一仓储环境下来源于湖南、江西、四川、广东等地区的烟叶样品,进行烟叶微生物分离鉴定,以大分子物质的降解能力为依据,筛选菌株进行烟丝发酵,由专家进行感官评吸评价发酵效果后,测定增香效果明显菌株的发酵烟丝化学成分及主要致香成分的含量,分析其增香机制,主要得到以下结果:1.从烤烟烟叶上总共筛得微生物647株,其中细菌(Bacteria)356株,真菌(Fungus)278株,放线菌(Actinomycete)13株。其中来自江西抚州的烟叶分离的微生物菌株最多,共计208株;微生物菌株主要分布在中部烟叶,占比46.52%,上部较少;不同等级的烟叶中,优等烟叶的微生物数量多于次等烟叶;烟叶陈化时间越短,分离得到的微生物数量越多。2.将具有多种降解能力的菌株用于烟叶的快速发酵中,得到五株对烟叶质量明显改善的菌株,其中菌株311、318菌株对烟叶质量评价提升4%以上。提取增香微生物的16S r DNA进行测序,结合生理生化试验,鉴定烟草增香微生物菌株176、311、117、123为芽孢杆菌属(Bacillus),菌株318为假单胞杆菌属(Pseudomonas)。菌株176具有蛋白质、淀粉降解能力;菌株311具有降解蛋白质和淀粉能力;菌株318具有蛋白质、淀粉及果胶降解能力;菌株117具有蛋白质、淀粉、纤维素降解能力;菌株123具有蛋白质、淀粉、果胶、纤维素降解能力。3.检测增香菌株发酵烟叶的主要化学物。经增香菌株发酵后,处理烟丝总糖含量下降,还原糖含量增加;菌株176、123、117处理的烟叶样品总氮含量降低,菌株311、318处理后的发酵液烟叶总氮含量升高,仅菌株117处理的烟碱含量增高,同时菌株117可使烟叶中钾离子含量降低,氯离子含量降低。4.增香菌株311、318处理后的烟丝,气质联用色谱检测其香气物质的含量。处理后的烟丝相对于对照样品的含氮物质、酮类、醇类含量均有增加,而酸类、酯类物质及酚类物质含量降低;分析烟叶各香气前提物质的降解产物含量,经菌株318发酵的烟丝中,类胡萝卜素降解产物、西柏烷类降解产物、苯丙氨酸降解物、生物碱、美拉德反应物均有增加;菌株311中美拉德反应物、生物碱类物质含量相对于对照烟丝含量减少。
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