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目的:近来,关于肿瘤微环境中物质代谢的研究成为了热点。特别是谷氨酰胺代谢对于肿瘤细胞以及免疫细胞的相互调节功能密切相关,其中可能直接影响了肿瘤细胞的免疫逃逸。研究发现膀胱癌细胞T24在谷氨酰胺剥夺后可以促进PD-L1表达上调,但对于免疫微环境中免疫细胞PD-1的表达以及PD-L1/PD-1介导的肿瘤逃逸机制尚未明确。所以本研究中,旨在通过剥夺肿瘤微环境中的谷氨酰胺来研究肿瘤细胞和免疫细胞的功能以及免疫标志物的表达变化,以期初步阐释肿瘤微环境中谷氨酰胺代谢对于PD-L1/PD-1介导肿瘤免疫逃逸的影响。方法:CD8+T细胞是使用人CD8+磁珠从健康成人外周血中分选获取的。使用qPCR和ELISA方法检测CD8+T细胞激活与未激活以及谷氨酰胺剥夺与否对于杀伤性因子（GZMB,PRF1）和细胞因子IFN-γ的表达影响。通过qPCR和Western Blot法来测定谷氨酰胺对于膀胱癌细胞T24和CD8+T细胞PD-L1,PD-1,T细胞抑制因子SHP2表达水平。使用CCK8法和活细胞工作站检测谷氨酰胺对于膀胱癌T24细胞和激活CD8+T细胞的增殖影响并检测其增殖相关因子（PCNA,Ki67）的表达水平。膀胱癌细胞T24和激活CD8+T细胞共培养,在m RNA和蛋白水平检测了谷氨酰胺对于总PD-L1,PD-1,SHP2表达影响,以确定谷氨酰胺对PD-L1/PD-1介导免疫逃逸的影响。使用ELISA方法检测了共培养组中CD8+T细胞杀伤性因子（GZMB,PRF1）和细胞因子IFN-γ表达水平以及谷氨酰胺对其表达的影响。同样使用CCK8检测方法和活细胞工作站检测了共培养组谷氨酰胺对于CD8+T细胞杀伤膀胱癌T24细胞的能力。结果:1.实验结果显示谷氨酰胺剥夺后明显抑制膀胱癌T24细胞及激活CD8+T细胞的增殖活性,但正常培养组激活的CD8+T细胞在体外失去持续性的刺激,其增殖活性也会降低。2.qPCR和ELISA结果显示CD8+T细胞的激活与否影响了自身的活性以及杀伤性。谷氨酰胺剥夺后CD8+T细胞活性及杀伤功能会明显受到抑制,同时CD8+T细胞的杀伤性会因自身活性的降低而降低。3.共培养组中,激活CD8+T细胞的杀伤性因子（GZMB、PRF1）以及细胞因子IFN-γ随着时间的推移表达量逐渐升高,谷氨酰胺剥夺会抑制其细胞因子的表达。共培养组中增长的T24细胞持续刺激CD8+T细胞,导致杀伤性因子和细胞因子持续性升高。4.单培养时,T24细胞主要表达PD-L1,PD-1低表达;CD8+T细胞主要表达PD-1,PD-L1低表达:T24细胞与激活CD8+T细胞都表达T细胞抑制性因子SHP2。谷氨酰胺剥夺后会引起T24细胞PD-L1表达上调,激活CD8+T细胞PD-1表达下调,而对于T24细胞和CD8+T细胞中T细胞抑制性因子SHP2表达无明显影响。5.膀胱癌T24细胞与激活CD8+T细胞共培养,12h后谷氨酰胺剥夺会使总PD-1、PD-L1及SHP2的表达下调。SHP2的表达变化与总PD-1/PD-L1结果保持一致。结论:本研究阐述了膀胱肿瘤微环境中谷氨酰胺对于膀胱癌细胞T24和激活CD8+T细胞的影响,以及微环境中谷氨酰胺如何通过PD-L1/PD-1机制影响膀胱癌的免疫逃逸。单培养组中谷氨酰胺剥夺会引T24细胞PD-L1表达上调,激活CD8+T细胞PD-1表达下调。但是共培养组中谷氨酰胺剥夺后总PD-L1,PD-1表达水平下调,同时总SHP2表达下调。这说明谷氨酰胺剥夺后会抑制膀胱肿瘤PD-L1/PD-1介导的免疫逃逸。