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目的:1.研究RLX对梗阻性肾病肾脏巨噬细胞极化以及肾纤维化的影响。2.研究RLX对梗阻性肾病后TLR4信号通路的影响。3.验证RLX通过TLR4信号通路调控巨噬细胞极化改善梗阻性肾病肾纤维化。方法:1.以单侧输尿管梗阻小鼠为梗阻性肾病模型,运用渗透压泵泵入RLX,观察给药后肾纤维化程度以及肾组织巨噬细胞极化情况;使用RAW264.7巨噬细胞系诱导形成M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞,研究RLX干预后巨噬细胞极化情况变化。2.以单侧输尿管梗阻小鼠为梗阻性肾病模型,运用渗透压泵泵入RLX,观察给药后TLR4信号通路变化情况;使用RAW264.7巨噬细胞系诱导形成M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞,研究RLX干预后巨噬细胞TLR4信号通路情况变化。3.使用RAW264.7巨噬细胞系诱导形成M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞,研究RLX和TLR4信号通路抑制剂干预后巨噬细胞极化情况变化。结果:1.UUO组较Sham组肾脏病理损害变化增加,并出现单核细胞渗出,并且肾脏胶原蛋白和Fibronectin的表达显著增高。UUO+relaxin组较UUO组肾脏病理损害变化减轻,单核细胞渗出情况减轻,胶原蛋白的表达显著降低。运用western blot的方法检测Fibronectin的表达情况,结果显示UUO+relaxin组较UUO组肾脏Fibronectin表达降低。UUO+relaxin组M1巨噬细胞标志物的表达情况较UUO组显著下降,而UUO+relaxin组M2巨噬细胞标志物的表达较UUO组显著上调。M0、M1和M2巨噬细胞在RLX处理后,其M1巨噬细胞标志物(iNOS,TNF-α,CCL-3,IL-23)的基因表达量下降而M2巨噬细胞标志物(arginase,CX3CR1,IL-4,Arg-1,IL-10,Ym1)的基因表达量升高。2.UUO组较Sham组TLR4信号通路蛋白TLR4、Myd88、p65、p-p65蛋白表达显著升高。UUO+relaxin组较UUO组TLR4信号通路蛋白TLR4、Myd88、p65、p-p65蛋白表达显著下降。M0、M1和M2巨噬细胞在RLX处理后TLR4信号通路相关蛋白TLR4、Myd88、p65、p-p65蛋白表达以及基因表达显著下降。3.M1巨噬细胞TAK-242+Relaxin组较Relaxin组M1巨噬细胞标志物iNOS蛋白表达升高,M2巨噬细胞TAK-242+relaxin组较Relaxin组M2巨噬细胞标志物iNOS蛋白表达下降。TAK-242+Relaxin组与TAK-242组比较,除了M2巨噬细胞中,M1巨噬细胞标志物IL-23和M2巨噬细胞标志物IL-10基因表达有差异,其余M1、M2巨噬细胞标志物iNOS、TNF-α,CCL-3和M2巨噬细胞标志物MRC、IL-4、arginase、iNOS、Ym1基因表达均无差异。结论:1.RLX能够改善梗阻性肾病肾纤维化;RLX能够促进梗阻性肾病肾脏巨噬细胞形成M2型极化;体外实验中RLX能够促进巨噬细胞形成M2型极化。2.RLX能够抑制UUO后小鼠肾脏TLR4信号通路,体外实验中RLX能够抑制巨噬细胞TLR4信号通路。3.T LR4信号通路抑制剂能够阻断RLX对巨噬细胞极化的调控