目的体外构建EGFR基因的小干扰RNA（siRNA）质粒,转染人卵巢癌细胞株skov3后检测RNA干扰（RNAi）对EGFR基因mRNA及蛋白表达水平、细胞凋亡和细胞周期的影响。方法根据EGFR mRNA序列设计特异性小发卡状RNA（shRNA）插入序列,体外合成该序列后将其定向克隆入线性化质粒pSilencer^TM 2.1-U6 neo,利用DNA测序证明插入序列的正确性。利用脂质体lipofectamine 2000真核转染试剂将重组质粒转染至skov3细胞中。实验分为三组:正常对照组;非特异性转染组和EGFR shRNA转染组。利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫细胞化学（ICC）方法分别鉴定转染前后EGFR基因在mRNA和蛋白水平表达的变化;采用AnnexinV/PI双染色标记的流式细胞仪法检测siRNA诱导的细胞凋亡,PI染色检测细胞周期阻滞。结果成功构建pSilencer-EGFR短发卡状siRNA真核表达载体;靶向EGFR的序列特异性的siRNA可以有效抑制Skov-3细胞EGFR基因的表达;流式细胞分析结果示:Skov-3细胞凋亡率明显增加,细胞周期出现明显的G₀/G₁期阻滞。结论利用RNAi技术设计并体外合成靶向EGFR的序列特异性shRNA转染人卵巢癌细胞株skov3细胞后可有效抑制skov3细胞中EGFR基因在mRNA和蛋白水平的表达,同时可以诱导细胞凋亡,并使细胞停滞在G₀/G₁期,RNAi可作为探索卵巢癌发生发展机制和基因治疗的有效工具。