背景和目的:原发性肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,发病隐匿,早期发生浸润和转移,手术切除率低,手术切除后复发率高,放疗和化疗敏感性低,肝移植、免疫和介入治疗效果均不理想。分子靶向治疗是目前原发性肝癌治疗研究的热点和希望之一。随着分子生物学的迅速发展以及人们对原发性肝癌分子机制认识的进一步加深,肝癌细胞信号转导的分子机理研究成为关键,通过深入研究原发性肝癌发生、粘附、侵袭、扩散与转移信号转导中关键的信号蛋白分子的相互作用,对于阐明原发性肝癌发病分子机理,寻找重要的关键信号蛋白分子靶点具有重要意义。在原发性肝癌的浸润和转移中,肝癌细胞的粘附是始动因素,是发生浸润和转移的基础,而细胞粘附是一系列粘附分子介导的,其中整合素家族是细胞粘附分子的重要的组成部分,是一类由一个α亚单位和一个β亚单位通过非共价键连接而成的异二聚体跨膜糖蛋白,整合素β1亚家族又是整合素家族中最重要的一类,其主要功能是介导细胞与细胞外基质(ECM)的粘附,同时接受并转导细胞外来的级联信号以调节细胞存活、凋亡、粘附运动等生命现象。在整合素β1介导的肝癌细胞的粘附转移信号转导过程中有许多信号途径和信号分子参与,Tec是否参与整合素β1介导的肝癌细胞的粘附转移信号转导过程目前尚不清楚。Tec最早是从肝癌组织中筛选到的一种存在于胞浆内的非受体酪氨酸蛋白激酶。Tec已被证实多种细胞因子、辅助分子及受体型蛋白酪氨酸激酶信号转导途径中的重要连接分子,被上游分子激活后,相互作用于Fak、Src、Erk等下游底物使之磷酸化,进行信号分子的逐级传递,同时参与并调节多种生物学效应。因此,我们旨在通过研究Tec在整合素β1介导的肝癌粘附信号过程中所发挥的作用以及Tec与其他重要细胞粘附信号蛋白之间的关联,证实Tec参与肝癌细胞粘附过程的信号转导及了解Tec调节肝癌细胞粘附具体的作用机理,以丰富和完善原发性肝癌细胞粘附的分子机理。方法:1、用免疫细胞化学的方法,检测整合素β1、Tec、Fak、Src、Erk在人肝癌细胞株HepG2细胞中的表达。2、用RT-PCR和Western Blot方法,检测整合素β1单抗、Src抑制剂PP2、Erk抑制剂PD98059分别处理前后HepG2细胞中Tec、Src、Fak、ErkmRNA及蛋白表达。3、用细胞粘附实验、MTT法以及siRNA干扰实验来检测整合素β1单抗、Src抑制剂PP2、Erk抑制剂PD98059以及TecsiRNA处理HepG2细胞后,观察肝癌细胞的粘附能力改变。结果:1、整合素β1、Tec、Fak、Src、Erk在人肝癌细胞株HepG2中均有明显的表达。2、不同浓度的抗体、抑制剂以及TecsiRNA处理HepG2细胞后,用MTT方法检测发现HepG2细胞粘附能力明显被抑制,生长受到抑制,凋亡增加,呈现剂量依赖性。3、不同浓度的抗体、抑制剂封闭抑制前后HepG2细胞中整合素β1、Fak、Src、Erk、TecmRNA及蛋白水平表达有明显的差异,呈现剂量依赖性。结论:1、首次证实Tec参与了肝癌细胞粘附的信号转导调控过程。2、Tec是肝癌细胞粘附信号转导调控过程中重要的信号连接和调控分子。3、在整合素β1介导的肝癌细胞粘附信号转导的过程中,Tec与Fak、Src、Erk等信号蛋白分子存在Cross-talk,Tec可通过不同信号转导分子和途径调节肝癌细胞粘附信号转导。