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益生菌因其具有改善动植物及人体生长、提高营养、刺激免疫功能、提高抗病能力等有益作用,被广泛应用于食品和饲料行业。在水产养殖中应用的益生菌,不仅兼具以上优点,同时还可有效降低抗生素滥用所导致的药物残留、致病菌耐药等风险,因此成为水产养殖行业及相关研究领域的关注热点。本研究利用芽孢菌特异性筛选方法从凡纳滨对虾肠道中分离肠道益生芽孢菌,分别以产酶活力、溶血性和对宿主安全性等相关指标对所分离菌株的益生菌特性进行综合评价,筛选获得对凡纳滨对虾具有益生功能的候选益生芽孢菌。经饲喂试验,进一步确定了所获益生芽孢菌在对虾生长发育及抗病能力方面的益生作用,并对其提升凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感染作用机理进行了初步研究。为凡纳滨对虾益生菌资源的开发和利用提供了理论依据和数据参考。主要研究结果如下:1.通过芽孢菌特异性分离、镜检和芽孢染色等方法,分别从凡纳滨对虾肠道、养殖池水和池底泥中分离得到芽孢杆菌33株。以菌株产胞外酶活力(蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶)、溶血性及安全性评价等指标,共筛选出3株候选益生芽孢菌B5、C6、C7-1。通过综合功能比较确定了B5为候选凡纳滨对虾益生芽孢菌,经基因组16S rDNA全长测序及系统学分析,初步鉴定其属厚壁菌门、芽孢杆菌科、大洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus),与Oceanobacillus picturae(墓画大洋芽孢杆菌)相似度为99%。2.将B5发酵菌体以2×10~8cfu/g的终浓度添加到凡纳滨对虾膨化饲料中进行1500尾对虾的饲喂试验,以市售枯草芽孢杆菌(BS)菌剂按1~2×10~8cfu/g终浓度添加饲喂作为阳性对照,另设不用任何菌剂的空白对照组。试验结果显示,B5饲喂组对虾增重率、饲料利用率和特定生长率与空白对照(CK)组相比均显著提升,分别提高了47.1%、30.3%和22.5%,而与阳性对照(BS)组无显著差异;与对虾免疫功能相关的血清碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)、溶菌酶(lysozyme,LZM)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,肝胰腺中Toll、IMD等免疫调控基因的相对转录水平均高于CK组和BS组(p<0.05);以副溶血弧菌病原菌攻毒感染实验对虾7天后,B5组的累计死亡率为21%,显著低于CK组的56%和BS组的42.36%。结果表明,与对照组相比,B5菌株饲喂组对虾的生长性能、免疫水平和抗病能力均显著升高。3.凡纳滨对虾肠道菌群高通量测序结果显示,与对照组相比,B5饲喂组的对虾肠道细菌种群丰富度指数(ACE、chao1和OTUs)和均匀度指数(Shannon)均显著升高;肠道细菌群的群落组成在科和属水平上,常见水生动物有害菌弧菌科(Vibrionaceae)和发光杆菌属(Photobacterium)的相对丰度显著降低。