【摘 要】
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目的:构建含人端粒酶RNA(hTR)核酶基因的真核表达质粒pBBS212Rz,并研究其对人食管癌EC9706细胞端粒酶活性和细胞生长、凋亡的影响.方法:设计针对人端粒酶RNA模板区第36位点的
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目的:构建含人端粒酶RNA(hTR)核酶基因的真核表达质粒pBBS212Rz,并研究其对人食管癌EC9706细胞端粒酶活性和细胞生长、凋亡的影响.方法:设计针对人端粒酶RNA模板区第36位点的锤头状核酶,人工合成其基因片段,利用分子克隆技术,定向克隆到pBBS212质粒上构建其真核表达质粒载体pBBS212Rz.通过脂质体介导的基因转染方法将其导入食管癌细胞EC9706中,同时转染空质粒作对照,经潮霉素筛选出阳性克隆.采用TRAP-ELISA法检测端粒酶活性,用倒置相差显微镜及流式细胞计数仪观察细胞生长和凋亡.结论:成功构建了端粒酶核酶真核表达质粒pBBS212Rz;端粒酶核酶对食管癌细胞端粒酶活性和细胞生长有抑制作用,锤头状核酶是一种有潜力的食管癌端粒酶活性抑制剂,可望成为食管癌治疗的新方法.
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