目的检测HIV-1亚型和原发性耐药,有助于了解HIV疫情及其动态变化、HIV感染者/艾滋病患者治疗、HIV疫情控制,具有重要的公共卫生与临床意义。云南边境地区关于HIV-1亚型、原发性耐药的研究报道较为零散,尚待进一步完善。因此,全面了解云南边境地区HIV-1亚型和原发性耐药具有重要意义。本研究调查云南省与缅甸、老挝、越南交界的德宏傣族景颇族自治州（德宏州）、西双版纳傣族自治州（版纳州）和红河哈尼族彝族自治州（红河州）新确诊的HIV感染者的HIV-1亚型、原发性耐药基因突变位点的种类和分布,并对中国籍和外籍感染者的数据进行对比分析,为云南边境地区艾滋病预防和治疗提供依据。方法在云南边境地区的德宏州、版纳州和红河州,通过筛查、过境检测、医院实验室检测等手段,在2015年11月1日至2016年10月31日期间,连续纳入150名缅甸、老挝或越南籍进入云南的新确诊HIV感染者;以县/市为单位在同一地点、同一时段纳入150名中国籍新确诊HIV感染者。所有研究对象在知情同意的情况下由经过统一培训的当地疾病预防控制中心专业人员采集血样,并进行面对面问卷调查,内容包括人口学信息和与HIV感染相关的其它信息。对血样通过HIV-1 RNA提取、RT-PCR、巢式PCR扩增env和pol部分基因区、PCR扩增产物电泳鉴定和测序、序列分析等程序进行HIV-1亚型和原发性耐药基因突变检测,以斯坦福大学HIV耐药数据库中监测相关耐药基因突变位点清单（2014年）判断耐药基因突变位点,利用基于斯坦福大学HIV耐药数据库的APP检测耐药种类及耐药水平。采用χ2检验探讨原发性耐药是否与HIV-1亚型存在关联,探讨感染者HIV-1亚型、原发性耐药与人口学特征、感染者发现方式、传播途径、多性伴和全程使用安全套是否存在关联,探讨多性伴、全程使用安全套与国籍、传播途径是否存在关联。采用Logistic回归模型分析感染者人口学特征、感染者发现方式、传播途径、多性伴、全程使用安全套是否与HIV-1亚型、原发性耐药有关联,以P<0.05作为评判是否有统计学意义的标准。结果1.云南边境地区新报告HIV感染者多性伴及安全套的使用情况1.1新报告的300名HIV感染者中,256人回答了确诊HIV感染前6个月内性伴数量,结果有23.8%（61/256）的人有多性伴。其中,中国籍多性伴比例为18.9%（25/132）,外籍多性伴比例为29.0%（36/124）,两者差异无统计学意义（χ2=3.588,P=0.058）。1.2新报告的300名HIV感染者中,208人回答了确诊HIV感染前6个月内安全套的使用情况,结果显示有25.5%（53/208）的人全程使用安全套。其中,中国籍安全套全程使用率为36.2%（38/105）,外籍安全套全程使用率为14.6%（15/103）,两者差异有统计学意义（χ2=12.808,P=0.000）。2.云南边境地区HIV-1基因型2.1 云南边境地区 HIV-1 基因型以 CRF01_AE（30.0%,68/227）、URFs（26.9%,61/227）、CRF08_BC（21.6%,49/227）为主,其它基因型包括 C 亚型（10.1%,23/227）、CRF07_BC（6.2%,14/227）、B 亚型（3.1%,7/227）、CRF55₀1B（1.3%,3/227）、A亚型（0.4%,1/227）和 CRF64_BC（0.4%,1/227）。URFs 包括 B/C（15.0%,34/227）、CRF01_AE/C（4.8%,11/227）、CRF01_AE/B/C（4.4%,10/227）和 CRF01_AE/B（2.6%,6/227）。2.2中国籍和外籍HIV-1基因型种类和分布不同。中国籍感染者检测到了 9种 HIV-1 基因型,其中 CRF08_BC（32.1%,34/106）、CRF01_AE（22.6%,24/106）和URFs（20.8%,22/106）位居前三。外籍感染者检测到了 6种HIV-1基因型,其中 CRF01_AE（36.4%,44/121）、URFs（32.2%,39/121）和 C 亚型（14.0%,17/121）排前三位。中国籍和外籍HIV-1基因型分布差异有统计学意义（χ2=31.526,P=0.000）。2.3德宏州边境地区HIV-1基因型种类复杂,URFs是首位的基因型,占39.5%（58/147）,版纳州CRF08_BC（55.2%,16/29）是首位的基因型,红河州CRF01_AE（60.8%,31/51）是首位的基因型。德宏州与版纳州（χ2=45.396,P=0.000）、德宏州与红河州（χ2=57.505,P=0.000）之间的 HIV-1亚型分布差异有统计学意义。版纳州与红河州之间的HIV-1亚型分布差异无统计学意义（χ2=8.481,P=0.050）。2.4德宏州的中国籍异性性传播感染者以URFs（28.3%,13/46）和CRF07_BC（19.6%,9/46）为主,缅甸籍异性性传播感染者以URFs（31.4%,16/51）和CRF01_AE（31.4%,16/51）为主,其分布差异有统计学意义（χ2=18.490,P=0.005）。2.5与其它基因型（包括B亚型、C亚型、CRF07_BC、CRF55₀1B、CRF64_BC、A亚型）相比,中国籍感染者比外籍感染者携带CRF01_AE的可能性小（中国籍:OR=0.392,95%CI:0.167～0.920）,工人感染者比其它工种的感染者携带CRF08_BC的可能性小（工人:OR=0.073,95%CI:0.006～0.831）,异性性接触传播感染者比静脉吸毒传播感染者携带URFs的可能性小（异性性接触传播:OR=2.653,95%CI:1.016～6.927）。3.云南边境地区HIV原发性耐药3.1云南边境地区HIV原发性耐药率为9.5%（17/179）。其中,中国籍感染者的原发性耐药率为13.6%（11/81）,外籍感染者的原发性耐药率为6.1%（6/98）,两个人群的原发性耐药率均处于中等水平（5.0%～15.0%）,其差异无统计学意义（χ2=2.870,P=0.090）。3.2德宏州、版纳州和红河州的HIV原发性耐药流行率分别为8.8%（10/114）、7.4%（2/27）和 13.2%（5/38）,均居中等水平（5.0%～15.0%）,其差异无统计学意义（χ2=0.866,P=0.751）。3.3德宏州边境地区中国籍感染者携带耐药株的比例（15.9%,7/44）高于缅甸籍感染者（4.3%,3/70）（χ2=4.561,P=0.044）。3.4原发性耐药基因突变位点涵盖三类抗病毒药物。NNRTIs的耐药基因突变位点为:K103N、Y181C、K101E、G190A、V106M 和 P225H。其中,K103N和V106M对EFV、NVP高度耐药,Y181C和G190A对NVP高度耐药,P225H对EFV、NVP中度耐药,G190A对EFV中度耐药。NRTIs耐药的基因突变位点为:M184V、K65R、T215S、V75M、L74I 和 K219Q。其中,M184V对FTC和3TC高度耐药,K65R对TDF高度耐药,但对ABC、FTC、3TC中度耐药。PIs的耐药基因突变位点为:L24I、L76V、L90M和M46I,未见对ATV/r、DRV/r、LPV/r高度耐药的突变位点。3.5中国籍感染者携带的耐药突变位点种类比外籍感染者多,共有11个。其中,耐 NNRTIs 突变位点有 K103N、P225H、V106M 以及 K101E,耐 NRTIs突变位点有 M184V、L74I、K65R 以及 K219Q,耐 PIs 的有 L24I、L76V、L90M三个位点。外籍感染者携带的耐药突变位点有6种,耐NNRTIs突变位点有 K103N、Y181C 以及 G190A,耐 NRTIs 突变位点有 T215S 和 V75M,耐 PIs的有M461。两个人群共同携带的耐药位点是K103N（耐NNRTIs）,对EFV、NVP均高度耐药,其余的都不一样。3.6各亚型中的耐药比例由高到低分别为CRF55₀1B 33.3%（1/3）、CRF07_BC 20.0%（1/5）、CRF01_AE/B 20.0%（1/5）、CRF01_AE 16.7%（9/54）、B/C 8.8%（3/34）和 CRF08_BC 7.7%（2/26）。其中,中国籍耐药基因型占比由大到小分别是 CRF01_AE/B 50.0%（1/2）、CRF55₀IB 33.3%（1/3）、CRF07_BC 25.0%（1/4）、CRF01_AE 21.1%（4/19）、B/C 12.5%（2/16）和CRF08_BC 9.1%（2/22）。外籍耐药基因型占比由大到小分别是CRF0 1_AE 14.3%（5/35）和 B/C 5.6%（1/18）。3.7在得知自己感染HIV前的6个月里,17例原发性耐药个体中3人（17.6%）有多性伴,其中2人为中国籍,1人为外籍;8人（47.1%）有不使用安全套的性行为,其中中国籍和外籍各占一半;5名（29.4%）携带高度耐药基因位点的感染者有不使用安全套的性行为,其中中国籍为2人,外籍为3人。3.8检出原发性多重耐药基因突变位点。1名中国籍HIV感染者测出耐NRTIs（K65R 和 M184V）和 NNRTIs 突变位点（K103N 和 P225H）。1 名越南籍HIV感染者,检出耐NRTIs（V75M）和PIs（M46I）突变位点。结论1.云南边境地区HIV感染者在确诊前传播HIV风险大云南边境地区HIV感染者在得知自己感染状况之前,多性伴比例较高,全程使用安全套比例低,HIV传播风险大。云南边境地区中国籍感染者安全套全程使用率低,外籍感染者安全套全程使用率更低。2.云南边境地区HIV-1基因型种类多,分布特征复杂2.1云南边境地区中国籍感染者中HIV-1基因型的种类比外籍感染者多,包括流行在云南省中东部地区的CRF08_BC和CRF07_BC,也有流行于中国东部男男性接触人群的CRF55₀1B。2.2德宏州边境地区无论是中国籍还是外籍感染者,无论是异性性接触传播途径还是静脉吸毒传播途径,URFs的比例均比较高,与缅甸北部地区较高的URFs占比相似。2.3红河州边境地区的CRF01_AE成为首位的基因型,越南籍感染者中CRF01 AE占第一位,中国籍感染者中CRF01 AE虽居第二,但与CRF08 BC的差距不大。这反映了红河州边境地区与邻近的越南,在HIV传播上有融合的趋势。2.4版纳州男男性接触人群的比例较大,CRF08_BC的比例高于其他地区该人群的比例,提示该地区男男性接触人群可能相对独立。3.云南边境地区HIV原发性耐药流行率达中度水平3.1德宏州、版纳州和红河州边境地区的耐药株流行率都到达了中度水平（5%～15%）。3.2超过半数携带原发性耐药基因突变位点的感染者对NNRTIs中的EFV和/或NVP高水平耐药。4.需进一步加强云南边境地区HIV防控4.1仅25.5%的HIV感染者在得知自己感染HIV之前的6个月内,性生活中使用安全套,传播HIV及耐药基因突变的风险大,提示需在大众人群中进一步加强艾滋病防治宣传及推广安全套的使用。4.2部分外籍感染者在云南边境地区也存在传播原发性耐药基因风险,需与邻近国家相关部门加强合作,共同管控HIV感染者。4.3在得知自己感染HIV前的6个月里,携带原发性耐药基因的感染者中,17.6%的人有多性伴,47.1%的人得知自己感染HIV前有不使用安全套的性行为。因此,有必要探索原发性耐药的有效筛查途径,对携带耐药基因的HIV感染者/AIDS病人进行个性化管理,积极开展早期抗病毒治疗,进一步加强HIV预防。4.4需警惕初治患者对EFV和NVP高水平原发耐药风险,有条件者在抗病毒治疗前可考虑做耐药检测,用于指导临床用药。