硒是人和动物生命活动必需的一种重要的微量元素。硒蛋白是硒共价结合在蛋白质中形成硒代半胱氨酸形式。硒蛋白W(SelW)是一种低分子量的细胞内硒蛋白。在不同的生物中,SelW的氨基酸序列高度同源。已有的研究表明SelW在多种组织器官均有表达,且以骨骼肌和脑表达量较高。目前对哺乳动物和啮齿类SelW功能的研究表明,SelW具有调节横纹肌代谢、钙代谢和抗氧化等作用。但是,对于鸡SelW的功能却未见报道。为深入研究鸡硒蛋白W的功能,我们根据鸡SelW的cDNA序列设计引物,对含完整ORF的cDNA序列进行扩增,利用重叠延伸PCR技术对cDNA中的Sec密码子进行突变,经序列分析,结果与参考序列同源性达99%以上,并将突变产物克隆进pGEX-6P-1表达载体,构建重组表达质粒pGEX-SelW,转化到Rosetta宿主菌,经IPTG诱导,实现了重组融合蛋白的高效表达,且均主要以包涵体形式表达,通过切胶的方法纯化重组融合蛋白,再利用凝血酶切掉GST标签,经第二次切胶纯化得到目的蛋白。多克隆抗体经Western blotting表明与相应的GST-SelW融合蛋白反应能产生特异性条带,而与空载体诱导后的GST标签蛋白不反应。纯化蛋白免疫BABL/c小鼠,利用细胞融合技术,经间接ELISA筛选和4次细胞亚克隆,获得2株杂交瘤细胞,分别命名为1B8和4H5。经单克隆抗体亚类试剂盒鉴定,均为IgM类抗体上清滴度分别为1:6400。制备了1B8和4H5腹水单抗,腹水滴度分别为1:12800和1:6400。2株杂交瘤细胞染色体数为103±5,明显多于SP2/0骨髓瘤细胞65~75条。2株杂交瘤细胞在体外连续传代3个月和冻存后再复苏均不影响抗体分泌的稳定性。与GST标签和鸡硒蛋白N均无交叉反应。亲和力分析表明,2株单抗对目的蛋白的亲和力高于重组融合蛋白和鸡SelW合成多肽,且亲和力较高,这些为单抗敏感、稳定和快捷的检测应用提供了必要的保证。总之,2株单抗的成功制备为鸡SelW的快速、特异性检测提供了检测试剂,同时也为鸡SelW功能进一步研究提供物质基础。