猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)是目前引起猪场繁殖障碍的主要病原之一,临床上可引起母猪发热、厌食、早产、流产、木乃伊胎、死胎和产弱仔等繁殖障碍及各种年龄猪的呼吸困难和仔猪的高死亡率,给世界养猪业造成了巨大的经济损失。PRRSV属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属,有6种结构蛋白,分别为GP2、GP3、GP4、GP5、M蛋白和N蛋白。近年来对PRRSV的研究主要集中在GP5、M和N蛋白,而对于次要结构蛋白GP2、GP3、GP4研究并不多,其在PRRSV生命周期中的作用并不十分清楚。本研究利用原核表达系统对PRRSV河南分离株Hn-1/06株GP3、GP4蛋白基因进行了体外表达,并建立间接免疫荧光(IFA)及间接免疫吸附试验(间接ELISA)方法,对鼠抗重组的GP3、GP4蛋白抗体的免疫活性性以及GP3、GP4蛋白在感染的Marc-145细胞内的分布情况进行了检测。本研究利用RT-PCR从PRRSV河南分离株Hn-1/06克隆得到了大小约963bp、676bp的含ORF3、ORF4基因的核苷酸片段,并将扩增的基因片段克隆到pTG19-T载体中进行测序。根据测得的ORF3、ORF4基因,并应用软件分析其推导的氨基酸序列,分别设计表达引物,扩增出两端带有BamH I、HindⅢ酶切位点的dORF3和BamH I、Xho I酶切位点的dORF4,亚克隆到原核表达载体pET-32a中构建了重组表达质粒pET-ORF3和pET-ORF4,在IPTG的诱导下成功表达,分别获得了大小约为44KDa的GP3融合蛋白和约为29KDa的GP4融合蛋白,与预期结果相符;对表达条件进一步优化,大量表达后,以尿素法对包涵体纯化;通过透析法对其复性,使目的蛋白可达到89%以上;经Western blot分析,证明融合蛋白具有良好的免疫原性和特异性。以GP3和GP4融合蛋白的包涵体、变性蛋白及复性蛋白分别免疫小鼠,获得了鼠抗重组GP3和GP4蛋白抗体。通过建立的间接ELISA及IFA方法对鼠抗重组GP3和GP4蛋白抗体的免疫活性以及GP3和GP4在PRRSV感染的Marc-145细胞内的分布进行了检测。结果显示鼠抗GP3、GP4重组蛋白抗体的效价为1:20且没有中和活性;在PRRSV感染24h后的Marc-145细胞内可检测到GP3、GP4,且随着感染后时间的增加,GP3和GP4也明显增加,其分布的部位也从细胞内转向细胞膜外。鼠源抗体的制备及IFA方法的建立,都为进一步研究GP3、GP4蛋白的结构和功能奠定了基础。