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目的：本课题在前期研究的基础上，提出高强度聚焦超声（high intensity focused ultrasound，HIFU）的异位效应可能与肿瘤细胞凋亡的增加和细胞毒性淋巴细胞诱导的穿孔素（perforin，Pf）— 颗粒酶B（granzyme B，GzB）和Fas配体（Fas ligand，FasL）途径活化有关这一假设。本研究拟通过观察HIFU治疗乳腺癌原发灶后肿瘤靶区、转移淋巴结內肿瘤细胞凋亡和淋巴细胞杀伤活性的变化，探讨HIFU治疗对肿瘤细胞凋亡，特别是异位肿瘤细胞凋亡的影响，阐明 HIFU异位效应的机制。 方法：48例病理学确诊的女性乳腺癌病人，分为HIFU组和对照组。其中，25例仅行乳腺癌改良根治术，即对照组；另23例为HIFU组，在乳腺癌改良根治术前1～2周先用HIFU治疗。手术后收集乳腺癌肿瘤局部组织及同侧腋窝淋巴结标本，用10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，制备5μm切片备用。采用HE染色观察两组病人原发灶和有肿瘤细胞转移的腋窝阳性淋巴结组织学变化; 采用TUNEL法和SP免疫组织化学染色法分别检测两组病人原发灶和腋窝淋巴结內肿瘤细胞的凋亡和细胞毒淋巴细胞FasL、GzB和Pf表达的变化,并对上述结果进行t检验、积差相关、多元线性回归分析。结果：（1）HIFU组原发灶肿瘤组织出现凝固性坏死，未检测到凋亡的肿瘤细胞，而对照组为1.10±0.76/HPF。HIFU组腋窝淋巴结內肿<WP=7>瘤细胞的凋亡数为2.66±0.57/HPF，对照组0.90±0.74/HPF，两组比较差异有统计学意义（P﹤0.001）。（2）HIFU组原发灶FasL、GzB、Pf阳性细胞数分别为29.6±12.3/mm~2、32.2±11.3/mm~2、12.2±8.2个/mm~2；对照组分别为21.2±9.8/mm~2、17.5±6.3/mm~2、6.8±5.2个/mm~2。两组比较，HIFU组原发灶FasL、GzB、Pf阳性细胞数明显增加，差异有显著性 (P<0.05)。（3）HIFU组转移阴性的腋窝淋巴结內FasL、GzB、Pf阳性细胞数分别为71.1±36.0/mm~2、70.5±31.2/mm~2、30.6±16.8个/mm~2，对照组分别为26.1±11.1、36.2±12.5、12.9±6.8个/mm~2。HIFU组转移阴性的腋窝淋巴结內FasL、GzB、Pf阳性细胞数明显高于对照组，差异有显著性 (P<0.05)。（4）HIFU组转移阳性的腋窝淋巴结內FasL、GzB、Pf阳性细胞数分别为55.9±15.8/mm~2、52.0±15.5/mm~2、25.4±8.1个/mm~2；对照组分别为32.5±13.1/mm~2、32.1±16.6/mm~2、 12.2±5.4/mm~2。两组比较，HIFU组上述各项指标均高于对照组，差异有统计学意义（P﹤0.05）。（5）HIFU组腋窝淋巴结內肿瘤细胞凋亡与FasL、GzB、Pf阳性细胞数的积差相关系数（r）分别为0.967、0.919、0.983，呈密切正相关性（P <0.001）；用多元回归分析得出直线方程:凋亡=0.012×FasL+0.010×GzB+0.032×Pf+0.700，多元线性回归方程具有显著性，P<0.05。结论：（1）HIFU治疗乳腺癌原发灶后，腋窝淋巴结內肿瘤细胞的凋亡数明显增加，这为HIFU的异位效应提供了直接的证据。（2）HIFU治疗后靶区和腋窝淋巴结內表达FasL、GzB、Pf的阳性细胞数明显增加，表明具有杀伤活性的淋巴细胞细胞增多，局部抗肿瘤免疫功能<WP=8>明显增强。（3）HIFU治疗乳腺癌原发灶后，腋窝淋巴结內淋巴细胞杀伤活性的增加与肿瘤细胞的凋亡呈明显的正相关关系，表明HIFU异位效应的主要机制是HIFU后宿主局部特异性抗肿瘤免疫反应被激活，细胞毒淋巴细胞通过穿孔素/颗粒酶、FasL两大途径诱导肿瘤细胞出现凋亡。