葛根为豆科植物野葛的干燥根,是中国传统的中草药之一,最初记载于《神农本草经》中,由于葛根的药用价值极高,因此葛根也被称为“亚洲人参”。葛根于2022年被中国国家卫生部正式公布为“药食同源”的植物,使得葛根能够更加广泛地被应用在抗氧化、辅助降血脂等功能性保健食品中。目的:本论文以葛根为研究主体,采用中药提取分离技术结合药效跟踪法,筛选葛根抗氧化活性组分;针对该活性组分研究其药效物质基础和治疗疾病的作用机制,为日后将葛根开发成天然抗氧化及治疗脂代谢疾病的产品提供理论基础。方法:1、葛根抗氧化活性组分的筛选:以葛根各活性组分的抗氧化活性为考察指标,结合总皂苷、总多糖、总黄酮含量,筛选出葛根最佳抗氧化物,在此基础上,对所得到的葛根最佳抗氧化物进行不同的提取分离后,依据相同筛选方法,得到葛根最佳抗氧化活性组分（APL）。2、葛根抗氧化活性组分的化学成分分析:采用现代化学成分分析技术高分辨液质联用技术等对APL中的有效组分及化学成分进行鉴定和分析,为后续指纹图谱的建立提供一定的参考依据。3、葛根抗氧化活性组分的指纹图谱研究:选用高效液相色谱法,并结合目前研究中公认的用于建立指纹图谱的评价系统:中药色谱指纹图谱相似度评价系统对色谱图进行分析,同时,综合基于液质联用技术鉴定分析以及查阅资料整理得到的化学成分,对APL进行高效液相指纹色谱图的建立。并在指纹图谱建立后选用一定的分析手段对APL进行化学模式识别分析,本研究选用的分析方法为聚类分析和主成分分析。4、葛根抗氧化活性组分对体外的降脂活性研究:（1）体外降脂主要以对油脂的吸附作用、对胆固醇和胆酸盐的结合能力为指标,初步比较体外降脂的能力;（2）以Hep G2人肝癌细胞为对象,以ROS、MDA、T-AOC、TC、TG为评价指标,结合油红O染色法,在细胞水平上研究APL的抗氧化、降血脂活性,综合探讨APL的体外抗氧化及降脂作用。5、葛根抗氧化活性组分对高脂饮食大鼠脂质代谢紊乱的作用研究:采用高脂饮食饲养大鼠进行脂代谢紊乱模型的建立,分别进行:（1）采用ELISA法检测T-AOC、SOD、MDA、CAT、GSH-Px水平,评价APL的体内抗氧化能力;（2）采用ELISA法检测TC、TG、LDL-C、HDL-C、AST、ALT水平,评价APL的降脂活性和对肝脏的保护能力;（3）采用H＆E染色法对肝脏切片进行染色,用以证实造模成功,并观察APL降脂能力;（4）采用免疫组织化学方法对APL的抗氧化能力进而影响脂代谢的作用进行研究。结果:1、葛根抗氧化活性组分的提取与分离:采用药效跟踪法,以抗氧化活性为主要考察指标,针对上述实验得到的5种葛根提取物的抗氧化能力进行筛选,初步得到葛根最佳抗氧化物,下一步对所得抗氧化物进行提取分离,将所得到的活性组分同时进行抗氧化活性的比较,应用Origin软件中的多项拟合计算上述所得的实验数据用的IC50值和A0.7值,并用Pearson相关分析方法,计算出葛根各活性成分的含量与其抗氧化活性之间的相关性。通过上述的提取及分析,最终得到葛根抗氧化活性组分（APL）。2、葛根抗氧化活性组分的化学成分分析:应用高分辨液相-质谱联用技术从APL中鉴定得到了31个化合物,其中黄酮类化合物9种,有机酸4种,皂苷类化合物2种,其他化合物16种。既往的研究表明,这31个化合物中的多数均具有一定的抗氧化及治疗脂代谢类疾病的作用。3、葛根抗氧化活性组分的指纹图谱研究:以化学成分分析为基础,采用高效液相色谱法得到一系列样品的高效液相色谱图,将所得到的色谱图进行叠加和分析,应用中药色谱指纹图谱相似度评价系统,以多点校正法建立APL的指纹图谱。根据生成的18个共有峰指纹图谱模式图,使用对照品比对法,对保留时间和色谱行为进行比对,指认出其中的8个色谱峰,分别为芒柄花苷、大豆苷、3’-甲氧基葛根素、3’-羟基葛根素、染料木苷、染料木素、葛根素、大豆苷元。且相关文献研究表明上述所指认的8种成分均具有较好的抗氧化活性,且多数已被报道具有治疗脂代谢疾病作用。4、葛根抗氧化活性组分体外降脂活性研究:（1）通过研究APL体外对油脂的吸附作用、体外结合胆固醇的能力、体外胆酸盐的吸附能力,结果表明APL有一定的降脂能力;（2）以Hep G2人肝癌细胞为对象,建立脂肪堆积模型和氧化损伤模型,通过对ROS、MDA、T-AOC、TC、TG的测定结果,结合显微镜下的观察,表明APL能够在细胞水平上有一定的降低TC、TG含量,降低ROS、MDA水平,提高T-AOC含量,表明在体外实验中,APL能够明显改善氧化损伤指标和脂质代谢指标。最终印证APL有良好抗氧化能力,也具有一定的降脂作用。5、葛根抗氧化活性组分对脂代谢的体内作用机制研究:（1）以高脂饮食诱导脂代谢模型大鼠后,通过后期给药及体重和饮食量的记录,可以初步判断APL能够降低高脂饮食引起的大鼠体重的增加。（2）通过对血浆及肝脏中SOD、MDA、CAT、GSH-Px的活性进行测定。结果表明高脂饮食会造成大鼠体内氧化应激紊乱,使体内抗氧化水平降低,而APL能够提高高脂饮食大鼠体内的氧化水平,有良好的体内抗氧化能力。（3）通过对大鼠血浆、肝脏中TC、TG、LDL-C、HDL-C的水平,以及大鼠粪便中TC、TG的含量的测定结果表明,APL能有改善高脂血症大鼠体内的血脂水平,有一定的降脂作用。（4）在实验中测定了大鼠血浆、肝脏中AST、ALT的活性以检测大鼠肝损伤的程度,实验结果表明,高脂饮食在很大程度上会降低AST和ALT水平,造成肝损伤,APL可明显的改善高脂模型大鼠体内的AST、ALT活性,说明APL能够有效改善由高脂饮食导致的肝损伤。（5）通过H＆E染色结果可以观察到,模型组的肝脏病理切片与正常对照大鼠相比,肝脏中有大量脂肪空腔,模型组大鼠出现严重的脂肪变性。正常组和高剂量组的病理切片观察结果没有明显差异。正常给药组的病理切片分析与正常对照组相同,未观察到统计学差异,证明模型建立成功,也表明APL具有良好的降脂能力。（6）为进一步研究APL对高脂模型大鼠脂代谢的作用,采用免疫组织化学方法检测肝脏中Nrf2和HO-1的表达,模型组大鼠组肝脏中的少量细胞核中发现了Nrf2表达,给与APL干预后,肝脏细胞核Nrf2的水平增加。此外,高脂饮食导致肝脏中HO-1的减少,APL治疗下,HO-1明显恢复,结果表明APL激活Nrf2/HO-1通路以增强抗氧化能力,这可能是APL治疗脂代谢类疾病的可能机制。结论:本实验采用现代中药提取分离技术结合药效跟踪法得到APL,针对所得到APL,采用高分辨液相-质谱联用技术明确APL的药效物质组成;采用HPLC技术结合现代分析方法建立APL的指纹图谱;在细胞水平初步探讨APL的降脂作用,并进一步印证APL的体外抗氧化能力;采用现代生物学技术在高脂大鼠模型上探讨APL治疗脂代谢类疾病的作用机制,为葛根抗氧化及治疗脂代谢疾病类产品的开发及应用提供理论依据。