近几年来,有关单链抗体在肿瘤免疫治疗中的研究进展较快。由于单链抗体分子量小、免疫原性低、组织穿透力强、特异性好,与单克隆抗体相比,在肿瘤的诊断和治疗方面展示了更好的应用前景。已发现大约85%的人类恶性肿瘤具有端粒酶活性,所以抑制端粒酶为抗肿瘤药物的设计提供了新的目标。大量研究表明, 端粒酶抑制剂将成为一种有效的新型抗肿瘤药物。本实验通过抗端粒酶逆转录酶(hTERT)单克隆抗体制备hTERT的单链抗体,研究其在Lewis肺癌细胞中的抑制肿瘤生长作用。采用RT-PCR技术从能持续分泌抗端粒酶hTERT单抗的杂交瘤细胞中克隆出抗体的轻链、重链可变区基因VL、VH 。Overlap PCR将VL和VH用(Gly4Ser)4连接成hTERT的ScFv基因,连入原核表达载体pET19b,构建成pET19b-ScFv,转入大肠杆菌BL21(DE3)中表达。通过SDS-PAGE和Western-blot分析,能够很好地检测到单链抗体的生物学活性。再将ScFv基因连入真核表达载体pEGFP-C1,构建成pEGFP-C1-ScFv,转染肿瘤细胞,表明其具有一定的抑制肿瘤细胞生长的作用。