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目的1、通过控制母体因素探究辅助生殖技术后枯萎卵的发生和相关胚胎因素。2、利用最新的Infinium850KDNA甲基化芯片,全面评估体外受精-胚胎移植（IVF-ET）/卵胞浆内单精子注射（ICSI）早期妊娠丢失中枯萎卵绒毛组织全基因组DNA的甲基化改变并与IVF-ET/ICSI早期妊娠丢失中胚胎停育绒毛组织DNA甲基化状态比较,筛选差异性DNA甲基化位点。3、通过焦磷酸测序方法验证Infinium 850K DNA甲基化芯片的结果,揭示相关位点甲基化异常在IVF-ET/ICSI后枯萎卵发生中的作用。方法1、IVF/ICSI双胎移植双胎妊娠中枯萎卵的相关胚胎因素:回顾性分析2012年1月～2018年1月在南方医科大学南方医院生殖中心行IVF/ICSI双胎移植后临床双绒毛膜双胎妊娠共798例,根据移植后B超检查分为双胎活产组（C组:413例）和消失双胎两组,其中消失双胎组分为枯萎卵合并单胎活产组（A组:136例）和胚胎停育合并单胎活产组（B组:188例）。比较3组间基本信息,如双方年龄、体质量指数（BMI）、基础窦卵泡数（AFC）、获卵数、基础卵泡刺激素（bFSH）/基础促黄体生成素（bLH）比值等,通过研究消失双胎期望在一定程度上控制母体因素的影响,更好的探究枯萎卵可能的相关胚胎因素如受精方式、移植胚胎的D3时期优质胚胎占比及移植周期等。2、IVF-ET/ICSI早期妊娠丢失中枯萎卵的差异DNA甲基化位点初筛:回顾性收集2012年1月-2018年1月在南方医院生殖中心行IVF-ET/ICSI单优质囊胚移植后因枯萎卵早期流产在南方医院妇产科门诊行清宫术+胚胎绒毛染色体检查（MLPA法）5例,以胎龄、性别、胚胎质量和年龄为标准匹配收集IVF-ET/ICSI单优质囊胚移植后因胚胎停育早期流产在南方医院妇产科门诊行清宫术+胚胎绒毛染色体检查（MLPA法）5例作为对照组。利用Infinium 850KDNA甲基化芯片分析整体甲基化水平差异及甲基化异常位点,再对甲基化位点进行生物信息学分析。3、IVF-ET/ICSI枯萎卵的差异DNA甲基化位点的验证:回顾性收集2012年1月-2018年1月在南方医院生殖中心行IVF/ICSI单优质囊胚移植后因枯萎卵早期流产在南方医院妇产科门诊行清宫术+胚胎绒毛染色体检查（MLPA法）5例为枯萎卵组,以胎龄、胚胎质量、年龄为标准匹配收集IVF/ICSI单优质囊胚移植后因胚胎停育早期流产行清宫术+胚胎绒毛染色体检查（MLPA法）5例作为胚胎停育组及IVF/ICSI双优质胚胎移植双绒毛膜双胎妊娠行减胎术+胚胎绒毛染色体检查（MLPA法）5例作为对照减胎组。利用焦磷酸测序方法检测GPI,TKTL2;PFKP;PFKM位点的甲基化异常程度,利用实时荧光定量核酸扩增检测系统（Real-time Quantitative PCR Detecting System,qPCR）检测位点基因表达量及与甲基化的相关性。结果1、IVF/ICSI双胎移植双胎妊娠中枯萎卵的相关胚胎因素:ABC三组患者的第 10天及 12天的血人绒毛膜促性腺激素（β-hCG）值（439.01±35.23VS495.83±29.62VS563.29±15.47）有统计学性差异（P＜0.05）,双方年龄、获卵数、AFC、不孕因素、bFSH/LH等母体因素均无显著差异（P＞0.05）。BCA三组患者的囊胚移植率有显著性差异（6.4%VS8.9%VS33.8%）,而来源D3优胚数也有显著性差异（85.9%VS82.7%VS76.1%）,差异有统计学意义（P＜0.05）;受精方式、来源D3优胚数及移植周期等无统计学差异（P＞0.05）。③两组消失双胎即枯萎卵合并单胎活产组与胚胎停育合并单胎活产组的子代出生结局在出生体重、分娩孕周、出生缺陷等方面无统计学差异。④经多因素Logistic回归分析,相对活产和胚胎停育而言囊胚移植是枯萎卵发生的危险因素（OR=13.405/3.441,P＜0.05）,低血 β-hCG 与枯萎卵的发生相关（OR=0.998/0.999,P＜0.05）。2、IVF-ET/ICSI早期妊娠丢失中枯萎卵的差异DNA甲基化位点初筛:比较枯萎卵绒毛组织组织与胚胎停育组织,共筛选出1864个差异性DNA甲基化位点。其中,去甲基化位点377个,超甲基化位点1487个。差异程度最大的位点包括:超甲基化位点:GPI,TKTL2;PFKP;PFKM。研究结果还发现,差异性DNA甲基化位点参与代谢过程过程,并富集于戊糖磷酸途径通路。3、IVF-ET/ICSI枯萎卵的差异DNA甲基化位点的验证:枯萎卵组的绒毛组织较于胚胎停育组和对照组,GPI、TKTL2、PFKP、PFKM位点的甲基化程度均显著升高。比较4个基因的相对表达量则发现,枯萎卵组的绒毛组织的GPI、TKTL2、PFKP、PFKM基因的相对表达量均显著降低。相关分析上述结果发现,通过相关性分析在15个绒毛组织中,GPI（r=-1.55,p＜0.05,R2=0.9883）,TKTL2（r=-1.23,p＜0.05,R2=0.9425）,PFKP（r=-1.46,p＜0.05.R2=0.9229）,PFKM（r=-1.25,p＜0.05,R2=0.9342）的甲基化异常程度均与其相对表达量成显著负相关。结论1、胚胎体外培养时间延长增加枯萎卵发生的风险,而低β-hCG水平是枯萎卵发生的预测因子。2、IVF-ET/ICSI早期妊娠丢失中枯萎卵的整体DNA甲基化水平高于胚胎停育组,甲基化差异位点有GPI,TKTL2;PFKP;PFKM等。代谢过程可能是参与早期妊娠丢失中枯萎卵发生的机制。3、IVF-ET/ICSI后枯萎卵绒毛组织中发现GPI、TKTL2、PFKP、PFKM的甲基化程度异常升高,GPI、TKTL2、PFKP、PFKM基因表达量降低。枯萎卵的发生可能是由于胚胎GPI、TKTL2、PFKP、PFKM基因发生超甲基化,基因表达水平明显降低,导致能量代谢异常无法维持胚胎正常发育。