目的:克隆并表达结核分枝杆菌重组融合蛋白Pst S1-Hsp16.3,建立基于重组融合蛋白Pst S1-Hsp16.3的纳米金免疫传感器和可视化免疫传感器,评价其诊断结核病的效率。方法:根据Gen Bank中结核分枝杆菌标准株H37Rv的pst S1和hsp16.3基因序列分别设计并合成引物,PCR扩增pst S1和hsp16.3基因片段,重叠延伸PCR技术扩增融合基因pst S1-hsp16.3,克隆至p MD18-T载体,挑取菌落进行菌落PCR和测序鉴定后,亚克隆至原核表达载体p ET-28a(+),将序列正确的重组质粒DNA转化至E.coli Resseta(DE3),诱导表达融合蛋白Pst S1-Hsp16.3,金属螯合层析纯化,免疫印迹法分析其反应原性。晶种成长法制备金纳米棒,经11-巯基十一烷酸(MUA)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)化学修饰后,与融合蛋白Pst S1-Hsp16.3连接,构建纳米金免疫传感器检测血清抗体。谷胱甘肽还原法制备金纳米簇,经EDC、NHS化学修饰后,与羊抗人Ig G抗体连接,以Pst S1-Hsp16.3为捕获抗原,以金纳米簇-羊抗人Ig G为标记抗体,建立可视化夹心免疫传感器检测血清抗体,并评价这两种检测方法对结核病的诊断价值。结果:成功构建了重组表达质粒p ET28a(+)-pst S1-hsp16.3,表达纯化获得分子量约60k Da的融合蛋白Pst S1-Hsp16.3,Western blot证明其具有良好的反应原性。基于融合蛋白Pst S1-Hsp16.3的纳米金免疫传感器的检测灵敏度为70.0%,特异性为92.0%,阳性预测值为89.7%,阴性预测值为75.4%及诊断效率为81.0%。基于金纳米簇模拟酶性质构建的可视化免疫传感器的检测灵敏度为70.0%,特异性为94.0%,阳性预测值为92.1%,阴性预测值为75.8%及诊断效率为82.0%。结论:利用重组DNA技术获得了具有反应原性的融合蛋白Pst S1-Hsp 16.3。基于融合蛋白Pst S1-Hsp16.3的纳米金免疫传感器及可视化免疫传感器均可作为结核病诊断的参考方法。