论文部分内容阅读
目的：使用PI3K-Akt信号通路的特异性抑制剂LY294002干预体内外脊髓损伤模型，WesternBlot方法检测CSPGs、GFAP表达量，探讨LY294002对脊髓损伤后胶质瘢痕形成的影响。方法：（1）将60只体重200～250g（200±8g）的SD大鼠，雌雄不限，随机分为3组，每组20只，钳夹法构建SD大鼠T10脊髓损伤模型，A组为假手术组，仅行椎板切除不损伤脊髓,于术后6h内行鞘内注射DMSO；B组为治疗组，于损伤6h内行鞘内注射溶解于DMSO的LY294002；C组为对照组，于损伤6h内行鞘内注射DMSO溶剂，采用BBB评分标准于SCI后1、2、4周分别对各实验组动物进行后肢运动功能评估；（2）分别于损伤后1、2、4周取大鼠脊髓组织，提取蛋白，通过WesternBlot方法检测各实验组CSPGs蛋白表达水平；（3）提取新生1～2d的SD新生大鼠脑组织，利用连续差速传代法培养星形胶质细胞，取免疫组化及免疫荧光鉴定为95%以上的第三代AS细胞用于后续试验。将AS细胞种板后分成4组，A组加入LY294002及完全培养基，B组加入DMSO及完全培养基，C组于TGF-β1诱导后加入含LY294002的培养基，D组TGF-β1诱导后加入DMSO及培养基，倒置显微镜下观察细胞形态并拍片。提取AS细胞蛋白，WesternBlot方法检测各实验组CSPGs及GFAP蛋白水平。结果：（1）体内试验SD大鼠T10脊髓损伤造模成功，病理显示脊髓组织明显充血，神经元变性。手术后，假手术组大鼠后肢BBB评分短时间内恢复正常，LY294002治疗组有所恢复，对照组恢复效果最差。WesternBlot结果显示假手术组无或仅低水平表达CSPGs，LY294002治疗组少量表达，对照组CSPGs表达量最高(P<0.01)；（2）体外采用连续差速传代法培养的AS细胞形态正常，活性强，纯度较高，经免疫组化及免疫荧光鉴定后纯度达97.3%。TGF-β1成功诱导体外神经损伤模型，引起AS发生形态学改变，胶质化程度增高。WesternBlot方法显示空白对照组无或低浓度表达GFAP和CSPGs，LY294002治疗组CSPGs和GFAP蛋白表达量低于TGF-β1损伤组(P<0.01)。结论：（1）LY294002抑制了SD大鼠脊髓损伤后CSPGs的合成，有效地改善大鼠后肢BBB评分，利于脊髓功能的恢复；（2）LY294002抑制体外神经损伤后星形胶质细胞GFAP的表达，并抑制CSPGs的合成；（4）PI3K-Akt信号通路介导了脊髓损伤后AS细胞GFAP、CSPGs的表达量上调，导致胶质瘢痕形成。