弓形虫是一种专性胞内寄生的顶复门原虫,可感染人及几乎所有的温血动物,给人类健康及畜牧业发展造成较大危害,研发弓形虫病新型诊断检测方法对保障公共卫生安全和畜牧业健康发展具有重要意义。弓形虫微线体2蛋白相关蛋白（M2AP）是一种由其微线体细胞器分泌的蛋白,它可参与虫体的滑行运动和入侵,在虫体入侵宿主细胞过程中发挥重要作用。先前的研究表明,弓形虫M2AP可分别与鸡和兔抗弓形虫血清反应,是一种潜在的诊断抗原。但对M2AP是否与感染弓形虫的其他动物血清反应还不清楚。另外,弓形虫M2AP与真球虫目的其他几种原虫存在较高的序列相似性,这提示弓形虫M2AP很可能与其他几种真球虫目原虫的血清存在交叉反应。有趣的是,生物信息学分析显示,弓形虫M2AP具有种特异性区域。因此,本研究对该区域进行了克隆、原核表达、反应原性和诊断特异性分析。首先,我们参照NCBI数据库中公布的弓形虫M2AP种特异性区域对应的基因序列,设计特异性引物对其进行了PCR扩增。然后,通过生物信息学分析,我们对获得的序列进行了理化性质、亲水性/疏水性、表面可及性、抗原指数、抗原表位和同源性分析;最后,我们对弓形虫M2AP种特异性区域进行了原核表达和纯化,通过Western Blot的方法分析了其与几种动物弓形虫抗体/阳性血清的反应原性,并分析了与其他几种真球虫目原虫阳性血清的交叉反应情况。结果显示,所扩增的M2AP种特异性序列与理论序列一致,对应的M2AP截短蛋白的理论分子质量约为9.7 k Da,总平均亲水性指数为0.897;分析获得该蛋白含有由26个氨基酸组成的一段完整的抗原表位,抗原指数较高;因此,M2AP截短蛋白很可能具有较好的反应原性。SDS-PAGE和Western Blot分析显示,我们成功重组表达了M2AP截短蛋白,约为40 k Da。该重组蛋白可分别与羊和兔抗弓形虫抗体以及猪和羊驼弓形虫阳性血清发生反应,但不与新孢子虫和柔嫩艾美耳球虫阳性血清反应,说明其具有较好的反应原性和特异性。综上所述,本研究首次对弓形虫M2AP种特异性区域对应的基因序列进行了克隆、表达,并分析了重组M2AP截短蛋白与多种血清的反应原性。研究结果证实M2AP截短蛋白具有较好的反应原性和特异性并增加了其应用的宿主范围,为研发弓形虫病新型诊断方法奠定了基础。